一、肾脏纤维化的研究进展（论文文献综述）
曹留洋,余海源[1]（2021）在《中医药防治糖尿病肾病肾脏纤维化的研究进展》文中研究表明肾脏纤维化是糖尿病肾病（diabetic nephropathy, DN）、肾小球肾炎、高血压肾病等多种肾脏疾病发生发展乃至进展到终末期肾病的一个主要病理改变,也是引发肾功能不全的重要原因之一。肾脏疾病的进展过程中激活多种细胞因子及信号通路,导致肾小球、肾小管间质的损伤,最终导致肾脏的纤维化。该病发病机制复杂,目前西医尚无有效的治疗措施,近年来中医药对于DN治疗的介入,在延缓DN肾脏纤维化的进程中做出了诸多贡献,本文主要就中西医对于本病的认识、临床治疗DN的一些常用中药的抗肾脏纤维化的药理机制及中药复方制剂在延缓DN肾脏纤维化的治疗机制方面展开综述。
韩聪[2]（2021）在《芪黄四物汤通过调控miRNA-mRNA共表达网络改善肾脏纤维化的机制研究》文中指出目的:本研究围绕慢性肾脏病（CKD）与肾脏纤维化（RF）开展临床与实验研究。首先通过前瞻性的临床随机对照试验初步探讨芪黄四物汤改善CKD与RF的有效性与安全性。在此基础上分别在体内、体外以环孢素A（CsA）诱导小鼠及人肾小管上皮细胞（HKC）RF模型,先进行体内研究观察芪黄四物汤通过调控miRNA-mRNA共表达网络对RF小鼠肾脏结构与功能的保护作用,再行体外研究观察芪黄四物汤通过调控共表达网络中的代表性miRNA-mRNA抑制HKC上皮间质转分化（EMT）进而改善RF的作用。通过临床与实验研究为芪黄四物汤防治CKD及RF提供理论依据及实验支撑。方法:1.芪黄四物汤治疗CKD3-5期患者有效性与安全性的研究:根据计算的样本量及入选标准共纳入80例CKD3-5期的患者,试验组与对照组各40例。对照组给以西医常规对症治疗,试验组在对照组的基础上加用芪黄四物汤,治疗周期为8周。运用SPSS19.0进行统计分析,于治疗4周、8周时观察血肌酐（Scr）、尿素氮（BUN）、尿酸（UA）、估算的肾小球滤过率（e GFR）、尿α1-微球蛋白（α1-MG）、尿NAG酶、尿蛋白/肌酐比值（UACR）的变化,于治疗8周时观察血红蛋白（HGB）、血钙、血磷、甲状旁腺激素（PTH）、转化生长因子β1（TGF-β1）、白细胞介素-6（IL-6）、超氧化物歧化酶（SOD）及中医证候积分的变化,并比较2组的中医证候有效率及临床总有效率。2.芪黄四物汤对CsA诱导的RF小鼠肾脏保护作用的研究:以CsA诱导建立小鼠RF模型（分为正常组,模型组,芪黄四物汤低、中、高剂量组及缬沙坦对照组）。观察芪黄四物汤干预后RF小鼠体质量、24h尿量等一般情况。通过肾脏HE、PAS、Masson染色观察肾脏病理变化,通过TUNEL法观察肾组织凋亡情况,通过生化分析或ELISA法检测肾功能与RF相关指标:Scr、BUN、UA、UACR、NAG、MDA、IL-6的变化。3.芪黄四物汤对RF小鼠miRNA-mRNA共表达网络的调控作用:本研究进一步对上述实验的小鼠（正常组、模型组、芪黄四物汤高剂量组）肾脏进行miRNA与mRNA联合测序。首先筛选芪黄四物汤改善RF的靶差异（DE）miRNAs并进行验证,同时通过生信分析（Target Scan等软件）预测DE miRNAs的靶DE mRNAs并通过Cytoscape构建DE miRNAs与其靶DE mRNAs的2个共表达网络（正常组vs模型组;芪黄四物汤高剂量组vs模型组）。进一步通过kegg富集出2个共表达网络中靶DE mRNAs的Top20通路,筛选出共同的通路即芪黄四物汤改善RF的靶通路,再进一步筛选出靶通路中的靶DE mRNAs,并通过qRT-PCR、Western Blot、免疫荧光及ELISA法对其中的RF相关靶DE mRNAs在基因与蛋白水平进行验证,同时为后续细胞实验选取代表性的miRNA-mRNA进一步进行研究。4.芪黄四物汤通过调控miR-21-5p/SMAD7轴对CsA诱导的HKC EMT的影响:以CsA干预HKC建立RF模型,分别采用MTT法、Transwel实验及流式法观察芪黄四物汤对HKC增殖、凋亡、迁移的影响。采用qRT-PCR及Western Blot法观察芪黄四物汤对EMT相关表型E-cadherin与a-SMA的影响,并观察其对动物实验筛选的部分靶miRNAs（miR-21-5p、miR-375-3p及miR-802）、部分靶mRNAs（SMAD7、TGFβ1）及SMAD3的影响。通过Target Scan预测到miR-21-5p与SMAD7是靶向调控对,进一步模拟或抑制miR-21-5p观察SMAD7、E-cadherin、a-SMA的表达及HKC迁移能力的变化。结果:1.芪黄四物汤治疗CKD3-5期患者安全有效:（1）临床总疗效:治疗后对照组的临床总有效率为62.16%,试验组的临床总有效率为78.38%,试验组治疗效果优于与对照组（P<0.05）。（2）中医证候积分及疗效:治疗后2组的中医证候积分均极显着下降（P<0.01）,对照组的中医证候总有效率为43.24%,试验组的中医证候总有效率为67.57%,试验组在改善中医证候积分（P<0.01）及中医证候总有效率（P<0.05）方面优于对照组。（3）肾功能相关指标:治疗后对照组有效改善了BUN、UA（P<0.05）,NAG（P<0.01）,Scr、e GFR、a1-MG、UACR与治疗前比无明显差异;试验组有效改善了BUN、UACR（P<0.01）,NAG、UA、Scr及e GFR（P<0.05）,a1-MG与治疗前比无明显差异;试验组在降低BUN及UACR方面优于对照组（P<0.05）。（4）CKD并发症指标:治疗后对照组有效改善了HGB、PTH（P<0.01）,血磷（P<0.05）,试验组有效改善了HGB、PTH及血磷（P<0.01）,2组血钙与治疗前比均无明显差异,试验组在升高HGB方面优于对照组（P<0.05）。（5）纤维化、氧化应激及炎症指标:治疗后对照组有效改善了TGF-β1（P<0.05）与IL-6（P<0.01）,SOD与治疗前无明显差异;试验组有效改善了TGF-β1、SOD（P<0.01）及IL-6（P<0.05）,试验组在降低TGF-β1方面优于对照组（P<0.05）。（6）治疗前后2组的肝功能均在正常范围且无明显差异（P>0.05）,2组均未有不良事件发生,试验过程安全有效。2.芪黄四物汤可调控miRNA-mRNA共表达网络改善小鼠RF:（1）芪黄四物汤各剂量组与模型组比较体质量及24小时尿量明显增加（P<0.01）,亦改善了Scr（P<0.05）、BUN（P<0.01）、UACR（P<0.01）、NAG（P<0.01或P<0.05）、MDA（P<0.01）,高剂量组相较于模型组改善了UA与及IL-6（P<0.05）。（2）芪黄四物汤各剂量组与模型组比较基底膜增厚、肾小管扩张、胞质空泡化、小动脉玻璃样变、间质纤维化等程度均减轻,极显着的改善了胶原容积分数（P<0.01）与肾组织细胞凋亡（P<0.01）。（3）miRNA测序结果显示模型组与正常组、芪黄四物汤高剂量组比较分别有55个、42个DE miRNAs（FC>1.5 or<0.67,P<0.05）,最终筛选出了芪黄四物汤改善RF的14个靶miRNAs,包括保护性的miRNAs（模型组下调,芪黄四物汤回调）:miR-677-3p、miR-138-2-3p、miR-3087-3p、miR-874-5p、miR-2137、miR-551b-3p、miR-187-3p,及损害性的miRNAs（模型组上调,芪黄四物汤回调）:miR-692、miR-137-3p、miR-21a-5p、miR-375-3p、miR-802-3p、miR-802-5p、miR-7b-5p,qRT-PCR的验证亦与测序结果高度一致。（4）mRNA的测序结果显示模型组与正常组比较有2463个DE mRNAs（FC>1.5 or<0.67,P<0.05）,其中1324（54%）个被55个DE miRNAs预测到,模型组与芪黄四物汤高剂量组比较有1898个DE mRNAs（FC>1.5 or<0.67,P<0.05）,其中679（36%）个被42个DE miRNAs预测到,我们构建了2个共表达网络并经KEGG富集靶DE mRNAs后筛选出了11条芪黄四物汤改善RF的靶通路:ECM受体相互作用、鞘脂代谢、白细胞跨内皮迁移、TGF-β信号通路、PPAR信号通路、不饱和脂肪酸的生物合成、内质网中的蛋白质加工、过氧化物酶体、色氨酸代谢、丁酸代谢及丙酸代谢。（5）在芪黄四物汤改善RF的11条靶通路中,共有37个靶DE mRNAs,它们在模型组的表达紊乱,又被芪黄四物汤回调,其中14个与RF（EMT及ECM沉积、TGF-β信号调控、内质网应激、脂肪酸代谢、线粒体氧化应激）密切相关。我们在基因和（或）蛋白水平对14个靶DE mRNAs进行了验证,与模型组比较,芪黄四物汤剂量依赖性或呈最佳浓度的降低了COL1A1、COL3A1、FN1、CD44、SPP1、MMP2、TGF-β1、PDIA6及DDIT3的基因与蛋白表达（P<0.01或P<0.05）,升高了SMAD7、PCK1、ACOX1、MPV17L与AGPS的基因和（或）蛋白表达（P<0.01或P<0.05）。此外,芪黄四物汤还升高了SOD的蛋白表达（P<0.01）,降低了8-OHd G的蛋白表达（P<0.01）。3.芪黄四物汤可通过miR-21-5p/SMAD7轴调控HKC EMT进而改善RF:（1）CsA剂量依赖性的抑制HKC增殖,在半数抑制（10mg/L,后续实验的浓度）的基础上芪黄四物汤15mg/m L（后续实验的浓度）促进HKC增殖最显着（P<0.01）。（2）CsA诱导下HKC的凋亡增加及迁移增强,芪黄四物汤减少了HKC的凋亡（P<0.01）,并抑制了HKC的迁移能力（P<0.01）。（3）与CsA诱导的模型组比较,芪黄四物汤升高了E-cadherin的基因（P<0.01）与蛋白（P<0.05）表达,降低了a-SMA的基因（P<0.05）与蛋白（P<0.01）表达。（4）与动物实验测序结果相一致,芪黄四物汤极显着的降低了CsA诱导的HKC miR-21-5p、miR-375-3p及miR-802的表达升高（P<0.01）,促进了SMAD7的基因与蛋白表达（P<0.01）,抑制了TGF-β1的基因（P<0.05）与蛋白（P<0.01）表达,同时抑制了SMAD3的基因（P<0.01）与蛋白（P<0.05）表达。（5）经Target Scan等生信软件预测到SMAD7是miR-21-5p潜在的靶基因,对HKC转染miR-21-5p模拟剂、抑制剂及相应阴性对照后,miR-21-5p mimics的表达提升20倍（P<0.01）而miR-21-5p inhibitor的表达下降5倍（P<0.01）,提示转染成功。（6）转染成功后用CsA造模并芪黄四物汤干预发现,与miRNA-NC mimics组相比,miR-21-5p mimics抑制了SMAD7的蛋白（P<0.01）与基因（P<0.05）表达,并降低了E-cadherin的蛋白表达（P<0.01）,升高了a-SMA的蛋白表达（P<0.01）,亦促进了HKC的迁移能力（P<0.01）;与miRNA-NC inhibitor组相比,miR-21-5p inhibitor促进了SMAD7的基因与蛋白表达（P<0.05）,并升高了E-cadherin的蛋白表达（P<0.01）、抑制了a-SMA的蛋白表达（P<0.01）,亦抑制了HKC的迁移能力（P<0.01）。结论:1.临床研究表明芪黄四物汤能有效改善慢性肾脏病3-5期患者的临床症状,保护肾功能,降低尿蛋白,缓解贫血及钙磷代谢紊乱等并发症,降低纤维化、氧化应激及微炎症状态,且安全有效,值得临床推广应用。2.进一步的体内研究发现,在CsA诱导的肾脏纤维化小鼠模型中,芪黄四物汤能调控紊乱的miRNA-mRNA共表达网络,通过改善共表达网络中与EMT及ECM受体相互作用、TGF-β信号调控、内质网应激、脂肪酸代谢及氧化应激相关的靶miRNAs与靶mRNAs,多靶点改善肾脏病理损伤、凋亡及ECM沉积,降低微炎症与氧化应激状态,保护肾功能,改善肾脏纤维化。3.再进一步的体外研究表明,在CsA诱导的HKC损伤模型中,芪黄四物汤可通过促进HKC增殖,抑制其凋亡及迁移,改善EMT相关表型基因的表达抑制EMT。其中在miRNA-mRNA共表达网络中,芪黄四物汤通过升高miR-21-5p进而降低其靶基因SMAD7的表达可能是其抑制EMT进而改善肾脏纤维化的重要机制。
高智宏[3]（2021）在《盐酸小檗碱对小鼠UUO模型诱导的肾脏纤维化的保护作用及其相关机制研究》文中研究表明目的:观察分离及结扎小鼠一侧输尿管所造成的UUO模型对小鼠肾脏纤维化的影响,探讨盐酸小檗碱（Berberine Hydrochloride,BBR）预处理及后处理对该过程的作用及机制。方法:随机将C57BL/6雄性小鼠24只分为假手术组（Sham组）、UUO模型组、小檗碱预处理组及小檗碱后处理组,每组6只。四组小鼠适应性喂养7天后,对模型组、预处理组及后处理组小鼠进行左侧输尿管结扎造模,造模成功后次日对预处理组小鼠进行2周的小檗碱灌胃治疗,造模4天后对后处理组小鼠小檗碱灌胃治疗,与此同时自造模次日起对Sham组及模型组进行等量生理盐水灌胃。至14天实验结束后留取肾脏标本,称量每只小鼠的体重、双肾重量及观察大体形态,HE和Masson染色观察肾脏病理学形态变化;Western Blot检测FN、Col-I、Col-III、α-SMA、E-cadherin、IL-1β的表达变化;免疫组化检测小檗碱对肾脏转分化指标α-SMA及E-cadherin的表达变化。应用SPSS26.0统计程序进行统计学分析。结果:1.相对sham组,UUO组FN、Col-I、Col-III蛋白表达量增加（P<0.05）,给予小檗碱灌胃后,预处理组及后处理组FN、Col-I、Col-III表达量较UUO组减少（P<0.05）。该组结果为UUO造模成功的标志。2.小檗碱对各组小鼠肾脏结构的影响小鼠1/2左侧肾脏做病理切片,进一步行HE、Masson染色。HE染色后,UUO组较sham组,小鼠肾脏损伤情况严重,部分肾小球代偿性肥大,管周间隙增宽,炎症细胞浸润明显,经小檗碱灌胃后,损伤程度有所下降;Masson染色后,较Sham组,UUO组肾脏纤维化明显,于肾小管间质处可见大量绿染胶原纤维,经小檗碱治疗后,胶原纤维沉积减轻（P<0.05）。3.小檗碱对肾脏纤维化改善机制的研究Western Blot结果显示,较Sham组,UUO组小鼠肾脏的α-SMA、IL-1β的蛋白表达水平升高（P<0.05）,E-cadherin的蛋白表达水平下降（P<0.05）;经小檗碱干预后,较UUO组,IL-1β及α-SMA的蛋白表达量下降(PIL-1β<0.05、预处理组Pα-SMA<0.05、后处理组Pα-SMA=0.0506),E-cadherin表达量有所增加（P<0.05）;同时免疫组化结果支持α-SMA及E-cadherin变化趋势（P<0.05）。结论:在非代谢性经典肾脏纤维化UUO模型中,小檗碱可以通过抑制肾脏转分化、抑制炎症反应途径来减轻肾脏纤维化程度,为今后非代谢性因素所致肾脏纤维化的治疗提供了新的思路及动物实验基础。
张炯[4]（2021）在《功能磁共振对慢性肾脏病患者肾脏纤维化状态的评估及多模态模型的建立》文中研究指明慢性肾脏疾病（chronic kidney disease,CKD）是目前全球性范围内公共卫生问题。2013年全球CKD患病率在8-16%之间。我国是CKD大国,2012年我国数据统计CKD的患病率大约为10.8%,大约1.3亿患者;其中又以慢性肾小球疾病最为常见。CKD的诊断表示一种疾病状态,意义是给予肾功能缓慢下降进行分期。肾小球滤过率（glomerular filter rate,GFR）评估是肾脏病诊治的关键环节,是反映CKD严重程度及进展程度的一个重要指标,对于指导临床用药和判断疾病进展和预后具有重要意义。目前临床上测定GFR的方法主要是基于99Tcm单光子发射体层成像术（single photon emission computed tomography,SPECT）的肾脏GFR测定和eGFR估算。肾功能水平与肾脏组织学改变,尤其是纤维化等慢性病变密切相关。组织纤维化是CKD进展的最终共同病理改变。肾脏纤维化是CKD进展的重要危险因素。虽然组织形态学改变能反映CKD的病情轻重,但是临床上取得组织学材料肾活检术取材局限,难以反映肾组织改变的全貌,且属有创性操作,不利于重复观察和随访病情变化。现今的主要诊断依据,即金标准仍然是经皮肾穿刺组织活检。肾脏纤维化是CKD进展的重要病理标志,在此过程中伴随着肾脏微循环状态的改变、组织缺氧、肾单位毁损。评估肾脏纤维化程度对于了解肾脏病病情、判断预后以及制定治疗方案非常有意义。然而,目前临床上缺乏对肾组织纤维化病变的非侵入性检查措施,现今的主要诊断依据,即金标准仍然是经皮肾穿刺组织活检。但是,活检的不足不仅表现在创伤性,还存在取材的局限性。近来,开发一些新的磁共振影像学（magnetic resonance imaging,MRI）技术,并成功地应用于临床,来评估组织纤维化病变程度。MRI无电离辐射,具有较高的软组织分辨率,可多平面成像,可以无需注射对比剂就能评估组织器官的生理功能和病理生理变化。随着新的功能序列的出现,功能磁共振发展迅速,并且腹部功能磁共振的研究也逐步认可其安全性和实用性。因为,MRI不仅提供实体器官复杂的解剖学信息,还可在水分子运动、细胞功能上揭示病变的特性。在肾脏病领域中,对肾移植患者进行磁共振弹性成像（magnetic resonance elastography,MRE）发现弹性数值可以预测移植肾功能预后。对CKD患者进行弥散加权成像（diffused weighted imaging,DWI）或体素内不相干运动（intravoxel incoherent motion,IVIM）成像,发现血清肌酐与DWI-ADC值间存在负相关。但是,在CKD患者中,尤其是慢性肾小球肾炎患者,存在慢性纤维化病变,目前国内针对功能磁共振对肾脏纤维化的研究鲜见,而且,临床工作中,还没有很好地建立起功能影像学数据与肾功能和肾组织纤维化病变的关联关系。因此,本研究重点分析三个肾脏纤维化相关组织病理学指标—管周毛细血管密度、间质细胞外基质含量和肾小管上皮细胞密度。新型MRI技术有体素内不相干运动成像（intravoxel motion diffusion weighted imaging,IVIM-DWI）,包括DWI-Standard ADC序列、DWI-Fraction序列和AQP序列,以及MRE技术。研究分为三个部分,分别从功能影像对CKD患者肾功能状态的评估,对CKD患者肾组织纤维化指标的映射关联,以及基于磁共振序列参数和肾功能指标,构建多模态模型,预测CKD患者肾脏纤维化程度。这三个部分层层递进,也是从CKD的肾功能、功能影像和组织学方面逐步展开,将功能影像对组织器官病变的定性分析提升到定量计算的水平。研究一:功能磁共振在评估慢性肾脏病患者肾功能状态中的研究背景及目的:我国是CKD大国,GFR是CKD病情评估和分期诊断的重要指标。目前临床评估CKD的方法主要是公式估算（eGFR）和SPECT-GFR测定。功能磁共振因其独特的对器官生理功能反映优势,在腹部器官功能,尤其是血流、水分子扩散等方面具有较高诊断价值。本部分研究,拟观察功能磁共振序列与CKD患者肾功能（GFR）之间的关联关系,确定能够评价GFR的相关磁共振序列。方法:通过回顾性队列研究数据,选取国家肾脏疾病临床医学研究中心2016年4月-2016年12月住院CKD患者为研究对象。患者均在GE MR 750 3.0 Tesla磁共振仪上接受IVIM-DWI、DKI、DTI、MRE序列扫描,使用ADW 4.6工作站中的Functool软件包中的后处理软件生成相应的功能磁共振伪彩图,获取相应的功能磁共振序列参数值。eGFR计算采用CKD-EPI公式,并同时接受SPECT-GFR检查。利用Pearson或Spearman相关性检验检测功能磁共振序列参数与肾功能指标的相关性。结果:（1）28例CKD患者纳入研究,期中女性10例（35.7%）,平均年龄39岁（95%CI:33-43岁）。DWI-Standard ADC、DWI-Fraction序列参数皮质区数据在CKD不同分期之间存在显着差异,随着CKD进展,参数值逐渐降低。CKD 1期肾皮质区DWI-Standard ADC值显着高于CKD 4期（1.91?0.11mm2/s*104vs.1.61?0.15mm2/s*104,P<0.01）;CKD 1期肾皮质区DWI-Fraction值显着高于CKD 4期（0.46?0.02mm2/s*104vs.0.36?0.04mm2/s*104,P<0.01）。DWI-Standard ADC皮质区参数与e GFR之间存在显着正相关（Rho=0.660,P<0.01）;DWI-Fraction皮质区参数与e GFR之间存在显着正相关（Rho=0.673,P=0.001）。DWI序列髓质区得到的数据也有类似统计学结果。（2）DWI-AQP序列参数在CKD不同分期之间存在显着差异,随着CKD进展,参数值逐渐升高。CKD 1期肾皮质区DWI-AQP值显着低于CKD 4期（0.24?0.06mm2/s*104vs.0.32?0.05mm2/s*104,P<0.05）。DWI-AQP皮质区参数值与e GFR之间存在显着负相关性（Rho=-0.506,P=0.006）。AQP在髓质区获得的参数也有类似统计学结果。（3）60Hz条件下,MRE序列参数在不同CKD分期之间存在显着差异,随着CKD进展,参数值逐渐降低。CKD 1期肾皮质区MRE值显着低于CKD 4期（4.565?0.575 KPa vs.3.728?0.575 KPa,P<0.05）。MRE皮质区参数值与e GFR之间存在显着正相关性（Rho=0.411,P=0.03）。MRE在髓质区获得的参数也有类似统计学结果。45Hz条件下的MRE序列,以及DKI、DTI相关序列与GFR之间的相关性指标统计学差异并不显着。结论:本文通过研究发现,DWI、MRE序列与GFR之间存在较好的相关性,有可能作为CKD患者肾功能损伤的评判候选指标。该部分研究结果也为后续进一步展开功能磁共振序列与肾脏组织纤维化具体形态学指标之间的联系研究提供基础数据。研究二:功能磁共振在评估慢性肾脏病患者肾组织纤维化中的研究背景和目的:研究内容一已经提供了DWI、MRE等功能磁共振序列与CKD患者GFR水平有相关性,在不同CKD分期间差异显着。然而,作为功能磁共振序列,其实际意义应该是能反映器官组织的病理生理变化。基于DWI-Standard ADC、DWI-Fraction、DWI-AQP及MRE序列的基本原理,和对人体组织器官病理生理状态反映的共性特点,提出科学假设,通过将CKD患者纤维化组织特点和功能磁共振序列进行映射关联,验证新型的MRI技术在评估CKD患者肾脏纤维化中的实际反映与关联特性。方法:本部分研究基于队列研究数据库,收集2016年1月至2017年12月在国家肾脏疾病临床医学研究中心住院,并纳入南京肾小球肾炎注册系统（Nanjing Glomerulonephritis Registry）的CKD患者。观察肾脏病理中皮质区间质细胞外基质含量和管周毛细血管密度,并根据患者接受的f MRI扫描序列参数,进行相关性分析研究。运用Aperio Scan Scope系统,通过分析Masson’s trichrome切片,分析细胞外基质含量。通过残余肾组织的CD34免疫组化染色,计算管周毛细血管数量,分析管周毛细血管分布密度。根据常规病理计算肾小球球性硬化比例和间质纤维化半定量评分,分为0分（纤维化<10%）,1分（纤维化10-30%）,2分（纤维化30-50%）,3分（纤维化>50%）。对残余肾组织进行AQP1染色,计算AQP1阳性肾小管比例。利用Pearson或Spearman相关性检验检测MRE序列参数与细胞外基质含量、DWI序列参数与管周毛细血管密度,AQP序列参数与组织中AQP1蛋白阳性表达肾小管比例的相关性。结果:（1）97例CKD患者纳入本部分研究,随着CKD进展,管周毛细血管分布密度和AQP1阳性肾小管数量显着降低,皮质区细胞外基质含量显着增加。（2）根据CKD分期,DWI-Standard ADC序列参数、DWI-Fraction参数和MRE参数均呈显着降低趋势。AQP参数在CKD不同分期之间变化无统计学差异;根据球性硬化严重程度分组和肾间质慢性化评分进行分组,也得到类似上述结果。（3）DWI-Standard ADC序列参数值与球性硬化比例之间存在负相关性（Rho=-0.428,P<0.001）,DWI-Fraction与序列参数值与球性硬化比例之间存在负相关性（Rho=-0.272,P=0.007）,MRE序列参数值与球性硬化比例之间存在负相关性（Rho=-0.519,P<0.001）。（4）DWI-Standard ADC序列参数与管周毛细血管分布密度呈正相关（Rho=0.244,P=0.016）;DWI-Fraction序列参数与管周毛细血管分布密度呈正相关（Rho=0.472,P=0.001）。（4）MRE序列参数与皮质区细胞外基质含量呈负相关性（Rho=-0.397,P<0.001）。（5）AQP-ADC参数值与肾组织AQP1蛋白表达量之间不存在显着相关性（Rho=-0.089,P=0.385）。结论:本部分研究给功能磁共振序列有效评估CKD患者肾脏纤维化问题提供了组织病理学支持证据,探索了磁共振与组织病理学之间的映射关系。DWI-Standard ADC序列、DWI-Fraction序列和MRE序列,不论从理论角度,还是实际数据结果,均提示未来在评估肾小球纤维化和肾皮质间质纤维化程度上有优势。基于本研究的数据结果,还需要更大样本的外部验证,以及更长期的随访研究。将传统的病理慢性化指标和这些新型的功能磁共振序列指标进行比较,以明确其对纤维化的评估作用和CKD进展的预后判断能力。研究三:基于功能磁共振、肾脏功能及肾组织病理学参数的多模态模型的建立背景和目的:该部分研究在研究一和二的基础上,基于功能磁共振参数、肾功能参数构建预测肾组织纤维化具体病理学指标的模型。方法:研究人群和基础临床病理数据同第二部分。肾脏纤维化相关组织病理学指标包括管周毛细血管密度和间质细胞外基质含量。功能磁共振指标包括IVIM-DWI和MRE。基于功能磁共振序列参数、e GFR构建预测肾组织纤维化指标的多重线性回归模型,根据多元回归模型中最小化差平方和原则构建最优拟合线。结果:（1）基于MRE序列参数和eGFR,构建反映皮质区细胞外基质含量的最适合方程为Interstitial Extracellular Matrix Volume=218.504-14.651×ln（MRE）-18.499×ln（eGFR）。CKD患者肾皮质区间质中细胞外基质含量与MRE序列参数值和e GFR的自然对数呈线性关系,二者P值均小于0.05（6.16e-05,0.0326和3.88e-10）。（2）基于DWI-Fraction和e GFR构建反应皮质区管周毛细血管分布密度的最适合方程为Peritubular Capillaries Density=17.914+9.403×（DWI-fraction）+0.112×（eGFR）。管周毛细血管分布密度与DWI-Fraction序列参数和eGFR之间存在线性相关,相比较eGFR而言,DWI-Fraction与管周毛细血管分布密度的关系相对较弱,P值偏大。（3）基于DWI-Standard ADC和eGFR构建反映皮质区管周毛细血管分布密度的最适合方程为Peritubular Capillaries Density=22.136-0.809×（DWI-Standard ADC）+0.130×（eGFR）。DWI-Standard ADC序列参数和eGFR相比,与管周毛细血管分布密度的相关性较弱,与DWI-Fraction相比也有类似结果。结论:本部分研究在前期研究基础之上,基于磁共振与组织病理学之间的映射关系,构建了由功能影像学参数和肾功能指标获取纤维化肾脏相关重要病理学特征指标的数学模型,对于促进功能影像在评估CKD纤维化水平中的临床应用具有重要意义。
安至超[5]（2021）在《基于肝肾同源探讨芪地糖肾方干预DN小鼠纤维化及胆汁酸的研究》文中指出研究背景和目的糖尿病肾脏病是临床上常见的疾病之一,给社会造成了沉重的经济负担。肾脏纤维化是糖尿病肾脏病重要的病理表现之一。既往的研究认为,胆汁酸与糖脂代谢之间存在着密切的关系,但是在近几年的研究中,学者发现肾脏中也存在着丰富的胆汁酸受体,有证据显示胆汁酸通路与纤维化之间存在着一定的联系。肝肾同源是重要的中医学概念,对于糖尿病肾脏病的治疗具有重要的指导意义。“胆汁酸——肾脏纤维化”通路与中医肝肾同源之间到底有什么样的关系,现在还不甚清楚。本研究的目的是通过分析胆汁酸和肾脏纤维化指标的水平与肝肾同源相关证素之间的相关性,进而阐释肝肾同源的物质基础,以丰富肝肾同源的科学内涵。蛋白尿是糖尿病肾脏病重要的临床表现之一,前期研究认为芪地糖肾方能够降低糖尿病肾病大鼠模型的蛋白尿水平但是具体机制仍有待进一步研究。芪地糖肾方是否通过胆汁酸途径降低糖尿病肾病的肾脏纤维化状态和糖尿病肾脏病蛋白尿的问题未见报道。本研究拟通过芪地糖肾方干预db/db糖尿病肾脏病小鼠模型,揭示了该组方治疗糖尿病肾病蛋白尿的作用机制。研究方法临床部分通过收集北京中医药大学东直门医院门诊和住院患者以及附近社区体检中的糖尿病肾脏病和糖尿病患者83例,收集患者的一般基础资料和尿液、血清标本,根据本团队的中医证素量表对收集的患者进行相关症状采集和评分,根据尿微量白蛋白/尿肌酐（ACR）值将入组患者分为单纯糖尿病（DM）组和糖尿病肾脏病（DKD）组,用Elisa方法检测上述患者的尿液胆汁酸、P-ⅢCOL、Ⅳ-COL、LN、HA和血清中TGF-β 1。分别比较DM组和DKD组患者肝虚证和肾虚证相关证素和胆汁酸、P-ⅢCOL、Ⅳ-COL、LN、HA和血清中TGF-β 1表达水平的差异;探讨胆汁酸、P-ⅢCOL、Ⅳ-COL、LN、HA和TGF-β1的表达水平与患者肝虚证和肾虚证相关证素和症状的相关性。实验部分通过饲养8周龄肥胖自发性2型糖尿病db/db雄性小鼠（SPF级）以制备糖尿病肾病模型,同时购买30只8周龄的C57BL/6J雄性小鼠做为对照组。将14周龄的小鼠进行分组,按随机分组法分为正常组20只、造模组45只。其中正常鼠分为正常组和正常给药组,造模组分为模型组、西药组、中药组,各组用生理盐水配制具体药物药灌胃,每天1次,灌胃液体积相等,具体药量依据前期研究有效剂量。给药期间所有小鼠每2周称重,每2周尾尖采血测血糖,每4周放入代谢笼中收集8小时尿液。于给药后的第12周末取材,检测各组小鼠血肌酐、甘油三酯、胆固醇、谷丙转氨酶、谷草转氨酶。HE和Masson染色光镜观察肾脏结构和纤维化染色改变,电镜观察肾脏超微病理结构表现,免疫组化观察肾脏纤维化指标变化,采用超高效液相色谱-串联质谱检测小鼠血清胆汁酸谱,分析胆汁酸谱与肾脏纤维化的相关性。在此基础之上,通过Western-Blot方法检测小鼠肾组织FXR表达,初步探究胆汁酸调节肾脏纤维化的机制。结果临床部分与糖尿病组相比,糖尿病肾脏病组ALT、AST、尿素氮、eGFR、肌酐、总胆固醇值比较有统计学意义（P<0.05）,其余指标比较无统计学差异（P>0.05）。与糖尿病组比较,糖尿病肾脏病组肝纤维化四项、胆汁酸和TGF-β 1比较无统计学差异（P>0.05）。与糖尿病组相比,糖尿病肾脏病组患者肝血虚评分明显升高,有统计学意义（P<0.05）,其它证候评分未见明显统计学意义。糖尿病肾脏病患者胆汁酸、TGF-β 1、P-ⅢCOL、Ⅳ-COL、LN、HA分别与肝虚、肾虚、肝血虚、肝阴虚、肾阴虚、肾阳虚、肾精亏虚和肝肾亏虚评分及相关症状进行相关分析,结果发现胆汁酸与肝血虚评分呈正相关,差异具有统计学意义;HA与肾精亏虚评分以及肝肾亏虚评分呈正相关,差异具有统计学意义,胶原3与肾精亏虚评分和肝肾亏虚评分呈现正相关,有统计学意义,LN与视物昏花评分呈现负相关（P<0.05）,TGF-β 1与视物昏花评分呈现正相关（P<0.05）,胆汁酸与视物昏花评分呈现负相关（P<0.05）,LN与腰膝冷痛评分呈现负相关（P<0.05）,HA与耳轮干枯萎缩评分呈正相关（P<0.05）,HA与小便短赤、腰膝冷痛评分呈负相关（P<0.05）,胆汁酸与精神萎靡评分呈现正相关（P<0.05）。实验部分与正常组相比,正常给药组生化指标之间变化无差异（P>0.05）,西药组谷草转氨酶下降有统计学意义（P<0.05）。与模型组相比,西药组谷草转氨酶下降有统计学意义（P<0.05）,中药组谷丙转氨酶下降有统计学意义（P<0.05）。与正常组相比,正常给药组血糖和体重变化无差异（P>0.05）,模型组、西药组和中药组变化均有统计学差异（P<0.05）。与模型组相比,西药组和中药组血糖和体重变化均无统计学差异（P>0.05）。与正常组相比,灌胃前模型组、西药组和中药组尿微量白蛋白水平均升高,之后三次也升高,差异有统计学差异（P<0.05）。与模型组相比,灌胃前西药组和中药组无差异,灌胃后三次检测均有降低,差异有统计学差异（P<0.05）。与正常组相比,模型组TGF-β 1、Smad2、Smad3和α-SMA水平变化有统计学差异（P<0.05）,与模型组相比,西药组和中药组TGF-β 1、Smad2、Smad3和α-SMA水平变化有统计学差异（P<0.05）。Masson染色显示,与正常组相比,其间质纤维化增生改变更为明显,而对于西药组和中药组来说,肾小球系膜基质增生并不明显,肾小球基底膜也未见明显增厚,尤其是肾间质纤维蛋白沉积与模型组相比有明显好转。在胆汁酸成分分析中发现,与正常组相比,模型组TCA、Tβ-MCA水平升高,差异有统计学意义（P<0.05）。与模型组相比,中药组β-MCA、T β-MCA和TCA水平降低,差异有统计学意义（P<0.05）。其余指标变化无统计学差异。WB方法检测肾脏FXR水平发现,各组水平变化之间无明显统计学差异。各胆汁酸成分与纤维化因子的相关性分析显示,TBAs、CDCA、α-MCA、TCDCA、Tβ-MCA 与 Smad3 呈正相关,T β-MCA 与 TGF-β 1呈正相关,T β-MCA和TCA与Smad2呈正相关。结论对于糖尿病肾脏病患者而言,胆汁酸和纤维化因子与肝虚证和肾虚证之间存在着相关性,丰富了肝肾同源理论的科学内涵。芪地糖肾方可以调节胆汁酸的分泌,进而改善肾脏的纤维化,也可以降低糖尿病肾病蛋白尿。
周学锋[6]（2021）在《糖肾方改善糖尿病肾脏纤维化和氧化应激损伤的机制研究》文中研究表明背景糖尿病肾脏疾病（diabetic kidney disease,DKD）是糖尿病（diabetes mellitus,DM）的一种严重的微血管并发症,是导致终末期肾脏疾病（end stage renal disease,ESRD）的主要原因之一。2019年,全球糖尿病患病率约为9.3%（4.63亿人）,这一数字预计将在2045年上升到10.9%（7亿人）,大约40%左右的糖尿病患者会变成DKD患者。DKD已经成为危害人类健康的严重疾病。肾脏纤维化是DKD发展过程中的一个重要的病理进程,目前针对DKD肾脏纤维化缺乏行之有效的治疗方案。转化生长因子β1（transforming growth factor-β1,TGFβ1）在肾脏纤维化的发生发展中具有重要的作用。相关研究证明,TGFβ1/Smad3通路能够通过调节长链非编码RNA（long non-coding RNAs,LncRNA）调节肾脏纤维化。相关研究发现,LncRNA MEG3（GENEID:55384）的过表达加重了细胞增殖,并诱导了细胞凋亡。LncRNA MEG3可以通过调节miR-181a/Egr-1/TLR4轴调节DKD大鼠的肾脏纤维化和炎症反应。氧化应激在DKD的发生和发展中也起着至关重要的作用。活性氧的过量产生可引起DKD患者早期系膜细胞肥大、系膜扩张、细胞外基质蛋白积聚、肾小球硬化、内皮细胞损伤、足细胞凋亡、蛋白尿、肾脏功能障碍。Keap1/Nrf2是非常重要的内源性抗氧化途径。DKD属于中医学“水肿”、“肾消”、“消渴”、“关格”等病证范畴。DKD肾脏纤维化属于典型的“久病入络”、“肾络瘀阻”。DKD之气阴两虚、肾络亏虚,产生痰浊、瘀血等产物阻滞肾络,痰瘀互结日久则络脉淤塞成积,治疗应该益气养阴,通络祛邪。糖肾方是本课题组负责人李平教授研制的治疗DKD的中药复方,由黄芪、生地黄、山茱萸、卫矛、三七、熟大黄、枳壳共七味药组成,具有益气养阴、活血通络的功效。前期多中心、随机、双盲和安慰剂对照试验证实糖肾方能够显着降低DKD患者的蛋白尿水平,并且改善肾小球滤过率（estimated Glomerularfiltrationrate,eGFR）。但是糖肾方治疗DKD肾脏纤维化以及氧化应激损伤的潜在机制仍未被深入探索。因此本课题利用网络药理学方法结合体内外实验验证糖肾方治疗DKD肾脏纤维化、氧化应激损伤的分子机制。目的1.基于网络药理学方法探索糖肾方治疗DKD肾脏纤维化的潜在机制;2.基于单侧肾切除合并STZ注射诱导的DKD大鼠模型,明确不同剂量糖肾方的治疗作用。3.基于单侧肾切除合并STZ注射诱导的DKD大鼠模型以及高糖诱导的HK2细胞损伤模型,探索糖肾方对DKD肾脏纤维化和氧化应激损伤的作用机制。方法1.利用网络药理学生物信息学方法探索糖肾方治疗DKD肾脏纤维化的主要活性化合物、作用靶点、参与活动以及作用通路。利用Cytoscape软件绘制可视化网络结构图、PPI图,并进行数据分析。2.利用单侧肾切除合并STZ注射诱导的DKD大鼠模型,观察糖肾方低剂量、糖肾方中剂量、糖肾方高剂量的疗效。8周龄Wistar大鼠,适应性喂养3天,测量基础数据:体重、血糖、尿量、尿蛋白定量。然后根据血糖和体重随机分组,Sham组和DKD组,DKD组进行单侧肾切除以及STZ注射造模手术;造模成功后,随机分为以下5组:DKD组、DKD+糖肾方低剂量组（1.2 g/kg/d）、DKD+糖肾方中剂量组（2.4g/kg/d）、DKD+糖肾方高剂量组（4.8g/kg/d）、福辛普利钠组（1.33mg/kg/d）。实验动物10周龄开始灌胃给药,实验期间每周测体重,每4周测血糖,连续灌胃给药20周后结束实验。取材,收集大鼠血清、肾脏、肝脏等标本,并进行血、尿生化检测,Elisa测定尿蛋白等。病理组织切片PAS、MASSON染色等评估肾脏损伤情况。3.利用单侧肾切除合并STZ注射诱导的DKD大鼠模型以及高糖诱导的HK2细胞损伤纤维化模型研究糖肾方治疗DKD肾脏纤维化机制。基于药效学实验结果,选择糖肾方低剂量组完成本章节机制研究。利用免疫组化、Western Blotting、免疫荧光、Real-time PCR 等实验技术评估糖肾方对 DKD 大鼠的肾脏皮质中 Collagen Ⅰ,Collagen Ⅳ,Fibronectin,TGFβ1,Smad 3,p-Smad 3,p-Smad 2/3,LncRNA MEG3 表达水平的影响。糖肾方给药干预高糖诱导的HK2细胞之后,观察HK2细胞中Collagen Ⅰ,Fibronectin,p-Smad 2/3,LncRNA MEG3mRNA 的变化情况。4.利用单侧肾切除合并STZ注射诱导的DKD大鼠模型以及高糖诱导的HK2细胞氧化应激损伤模型研究糖肾方治疗DKD氧化应激损伤的机制。实验分组与方法3相同,利用免疫组化、Western Blotting、免疫荧光、Real-time PCR等实验技术评估糖肾方对DKD大鼠的肾脏皮质中Keap1,Nrf2,HO1,3-NT的影响。利用DHE染色法检测DKD大鼠的肾脏皮质中ROS的含量。糖肾方给药干预高糖诱导的HK2细胞之后,观察HK2细胞中Keap1,Nrf2,HO1的变化情况。结果1.网络药理学研究发现糖肾方的主要活性成分是:槲皮素,beta-谷甾醇,山奈酚,DiincarviloneA,阿魏酸甲酯,地黄苦苷元,羟基-3-甲氧基肉桂醛,豆甾醇,4-羟基肉桂酸甲酯,7-O-methylisomucronulatol;糖肾方治疗DKD肾脏纤维化的核心靶点有:血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor,VEGFA）,表皮生长因子受体（epidermal growth factorreceptor,EGFR）,纤连蛋白 1（fibronectin 1,FN1）,TGFβ1,SMAD3,SMAD2等。GO富集分析发现糖肾方参与了抗氧化的生物过程,据此,我们挖掘了与糖肾方有关的氧化应激相关靶点,超氧化物歧物酶1（Superoxidedismutase,SOD1）,HO1,Keap1,Nrf2。糖肾方治疗DKD肾脏纤维化可能是通过调整TGFβ/Smad通路以及Keap1/Nrf2抗氧化应激来实现的。2.药效学结果证明糖肾方能够改善DKD大鼠的肾脏损伤。DKD组大鼠从实验开始时,体重和状态较Sham组较差,随着实验的进行,体重差异持续增加。药物干预第20周时,与DKD组相比较,各给药组的大鼠状态均有改善。糖肾方低剂量、中剂量组大鼠体重从药物干预第14周时体重高于DKD组,并持续到实验结束。DKD组大鼠血糖水平从实验开始时即明显高于Sham组,直到实验结束。糖肾方低剂量、中剂量、高剂量以及福辛普利钠组的血糖水平从实验药物干预第16周开始下降,持续到实验第20周时,显着低于DKD组血糖水平。DKD大鼠的脏器指数、24h尿量、尿蛋白/肌酐比值、血清肌酐、血清尿素氮、丙氨酸氨基转移酶、谷氨酸氨基转移酶、血脂水平等均显着高于Sham组,糖肾方低剂量、中剂量、高剂量以及福辛普利钠治疗DKD大鼠20周之后,均能够显着降低24h尿量,减少尿蛋白排泄量,改善肾脏功能、肝脏功能,纠正血脂紊乱;PAS和Masson’s Trichrome染色显示,DKD组大鼠肾脏出现了显着的肾小球系膜基质增生和肾小管损伤,肾间质纤维化,糖肾方低剂量、中剂量、高剂量以及福辛普利钠干预治疗后,能够改善DKD大鼠肾脏的病理损伤.3.糖肾方能够通过调节TGFβ1/Smad 3通路以及LncRNA MEG3改善DKD肾脏纤维化。与Sham组相比较,DKD大鼠肾脏皮质中Collagen Ⅰ,Collagen Ⅳ,Fibronectin的蛋白和基因表达水平均显着升高。DKD大鼠肾脏皮质中的TGFβ1,p-Smad 2/3,Smad3,p-Smad3蛋白表达水平明显高于Sham组。DKD大鼠肾脏皮质中LncRNA MEG3的基因表达水平明显高于Sham组。给予糖肾方干预治疗20周后,可以显着降低DKD大鼠的Collagen Ⅰ,Collagen Ⅳ,Fibronectin,TGFβ1,p-Smad2/3,Smad3,p-Smad3,LncRNA MEG3的表达。糖肾方可以改善高糖诱导的HK2细胞中Collagen Ⅰ,Fibronectin蛋白的沉积以及Smad 2/3蛋白的磷酸化。下调TGFβ1 mRNA以及Lnc RNA MEG3 mRNA的表达水平。4.糖肾方能够通过调控Keap1/Nrf2信号通路改善DKD氧化应激损伤。DKD大鼠中MDA含量明显高于Sham组,SOD含量明显低于Sham组。DKD大鼠肾脏皮质中的3-NT、Keap1蛋白和基因表达水平显着升高,Nrf2、HO1蛋白表达水平显着降低;免疫荧光结果显示,DKD大鼠肾脏皮质中的ROS含量增加;给予糖肾方干预治疗20周后,能够显着降低DKD大鼠3-NT、Keap1蛋白和基因的表达水平,上调DKD大鼠肾脏皮质中Nrf2、HO1的蛋白表达水平。此外,糖肾方可以降低NOX4基因表达水平,提高TXNRD1和GCLC基因表达水平。糖肾方可以减少高糖诱导的HK2细胞中ROS的含量,提高Nrf2蛋白以及基因表达水平,降低Keap1蛋白以及基因表达水平。结论本研究利用网络药理学预测糖肾方治疗DKD肾脏纤维化的潜在靶点,并在DKD动物模型以及HG诱导的HK2细胞中进行验证,明确了糖肾方通过调节TGFβ1/Smad3通路以及LncRNA MEG3改善DKD肾脏纤维化;通过调控Keap1/Nrf 2信号通路改善DKD氧化应激损伤。
魏雪娇[7]（2021）在《慢性肾脏病患者血清低氧诱导因子-1α水平及其与肾脏纤维化的关系》文中研究表明目的:通过检测慢性肾脏病（Chronic kidney disease,CKD）患者血清中低氧诱导因子-1α（Hypoxia inducible factor-1α,HIF-1α）、转化生长因子-β1（Transforming growth factor-beta 1,TGF-β1）和α-平滑肌肌动蛋白（α-Smooth muscle actin,α-SMA）的含量及变化水平,探讨HIF-1α对肾脏纤维化的影响。方法:选择2020年08月至2021年02月于吉林大学第一医院肾病内科就诊,其中被确诊为CKD的患者120例。利用MDRD公式估算肾小球滤过率（Estimated glomerular filtration rate,e GFR）,根据e GFR将患者分为CKD1～5期,CKD1-2期为30例,其余各期均为30例。健康对照组30例为本院体检中心接受体检的健康人群。分别对患者的性别、年龄、体重、既往病史等一般资料及血肌酐、尿素氮、血清白蛋白、外周血红细胞计数、血红蛋白等临床资料进行数据收集与整理。通过酶联免疫吸附试验（Enzyme linked immunosorbent assay,ELISA）方法检测血清中HIF-1α、TGF-β1和α-SMA的水平,通过统计学软件分析不同分期CKD患者血清中HIF-1α水平与各相关因素的关系,从而探讨HIF-1α对肾脏纤维化的影响。结果:（1）与健康对照组相比,CKD3-5期患者血清中肌酐、尿素氮、肾小球滤过率、血红蛋白和红细胞计数均具有显着差异（P<0.05）,且随着CKD分期的增加血肌酐、尿素氮含量逐渐升高,肾小球滤过率、血红蛋白及红细胞计数含量逐渐下降,差异具有统计学意义（P<0.05）;CKD1-5期患者血清中ALB含量较健康对照组相比呈下降趋势（P<0.05）。（2）CKD1-2期、CKD3期、CKD4期、CKD5期血清中TGF-β1水平分别是9.78（9.14,10.14）μg/L、10.03（9.25,11.26）μg/L、11.08（10.21,12.93）μg/L、15.52（12.82,17.77）μg/L;健康对照组血清中TGF-β1水平为7.44（6.36,8.59）μg/L。与健康对照组相比,CKD患者血清中TGF-β1水平明显增加,差异具有统计学意义（P<0.05）。其中CKD4期TGF-β1水平较CKD1-2期明显升高,CKD5期TGF-β1水平较CKD各期均明显升高,差异有统计学意义（P<0.05）,且TGF-β1水平在CKD各组间呈现逐渐升高的趋势。（3）CKD1-2期、CKD3期、CKD4期、CKD5期血清中α-SMA水平分别是97.86（75.58,119.18）ng/L、110.46（81.15,129.84）ng/L、122.57（102.71,170.29）ng/L、222.37（171.26,269.36）ng/L。健康对照组血清中α-SMA水平为65.89（47.96,76.30）ng/L。与健康对照组相比,CKD3-5期患者血清中α-SMA水平明显增加,差异具有统计学意义（P<0.05）,其中CKD5期α-SMA水平较CKD各期均明显升高,差异有统计学意义（P<0.05）,且α-SMA水平在CKD各组间呈现逐渐升高的趋势。（4）CKD1-2期、CKD3期、CKD4期、CKD5期血清中HIF-1α水平分别是47.17（40.13,62.16）ng/L、51.09（39.72,68.98）ng/L、71.98（41.79,83.77）ng/L、103.62（79.32,115.00）ng/L;健康对照组血清中HIF-1α水平为36.20（18.63,46.13）ng/L。与健康对照组相比,CKD3-5期患者血清中HIF-1α水平明显升高,差异具有统计学意义（P<0.05）,其中CKD5期HIF-1α水平较CKD1-2期及CKD3期明显升高,差异有统计学意义（P<0.05）,且HIF-1α水平在CKD各组间呈现逐渐升高的趋势。（5）CKD患者血清HIF-1α水平与临床指标相关性分析:HIF-1α水平与BUN及Scr水平呈正相关（r=0.433,0.478,P<0.01）,与e GFR水平呈负相关（r=-0.476,P<0.01）;与HB及RBC水平呈负相关（r=-0.215,-0.238,P<0.01）。（6）CKD患者血清HIF-1α水平与纤维化指标相关性分析:HIF-1α水平与TGF-β1呈正相关（r=0.575,P<0.01）;与α-SMA呈正相关（r=0.459,P<0.01）。结论:（1）CKD患者血清HIF-1α水平较正常人明显升高,且随着CKD进展,HIF-1α水平逐渐升高,提示HIF-1α可作为评价CKD的指标之一。（2）CKD患者血清TGF-β1、α-SMA水平随CKD分期增加逐渐升高,提示随着CKD进展,肾脏纤维化程度逐渐加重。（3）CKD患者血清HIF-1α水平与TGF-β1、α-SMA呈正相关,提示HIF-1α可能通过影响TGF-β1、α-SMA蛋白的水平,参与CKD患者肾脏纤维化发生和发展的过程。
黄娟[8]（2020）在《短期高盐饮食对不同年龄、性别C57BL/6J小鼠肾脏纤维化的影响及机制研究》文中认为目的:探讨短期高盐饮食对不同年龄、性别C57BL/6J小鼠肾脏纤维化的影响及其可能的作用机制。方法:80只清洁级健康C57BL/6J小鼠,分为幼年组（6-8周龄）及成年组（16-18周龄）,每年龄段各40只,雌雄各半,分笼饲养,适应性喂养1周后,将各年龄段小鼠均随机分为雄鼠正常盐组（含0.5%NaCl饲料喂养,NS组）、雄鼠高盐组（含8%NaCl饲料喂养,HS组）、雌鼠NS组、雌鼠HS组,每组各10只。测小鼠尾动脉血压,1次/周,共3周。代谢笼收集各组小鼠24h尿液;3周测定血肌酐、血尿素氮、24h尿微量白蛋白（mALB）及24h尿钠、钾含量,计算24h尿钠/钾比;HE、PAS、Masson染色观察肾脏形态及纤维化。ELISA法检测小鼠血清雌激素、肾脏血管紧张素（1-7）[Angiotension（1-7）]含量;免疫组织化学法检测小鼠肾脏Ⅰ型胶原（Collagen Ⅰ,ColⅠ）、Ⅲ型胶原（Collagen Ⅲ,Col Ⅲ）、肾脏损伤分子-1（Kidney damage molecules-1,Kim-1）、平滑肌肌动蛋白（α-smooth muscle actin,α-SMA）、波形蛋白（Vimentin）、E-钙粘蛋白（E-cadherin）、血管紧张素转换酶 2（Angiotensin converting enzyme 2,ACE2）、Mas 受体（MasR）、血管紧张素转换酶（Angiotensin converting enzyme,ACE）及血管紧张素 Ⅱ 1 型受体（Angiotensin Ⅱ type 1 receptor,AT1R）蛋白的分布;Western blotting 检测小鼠肾脏 Col Ⅰ、Col Ⅲ、Kim-1、α-SMA、Vimentin、E-cadherin、TGF-β1、p-Smad3、ACE2、MasR、ACE、Ang Ⅱ 及 AT1R 蛋白的表达。结果:（1）在幼年组（6-8w）C57BL/6J小鼠中:实验第3周各组间小鼠尾动脉收缩压比较差异均无统计学意义（P>0.05）;与同性别NS组小鼠比,HS组小鼠24h mALB、24h尿钠、24h尿钾及24h尿钠/钾比均升高（P<0.05）。与同性别NS组小鼠比,HS组小鼠肾小球硬化指数、肾小球纤维化指数及肾间质纤维化指数均升高（P<0.05）;与雄鼠HS相比,雌鼠HS组肾小球硬化指数、肾小球纤维化指数及肾间质纤维化指数均减少（P<0.05）。雌鼠血清雌激素含量均高于雄鼠。与同性别NS组比,HS组小鼠Ang（1-7）含量减少,COL Ⅰ、COLⅢ、Kim-1、α-SMA、Vimentin、TGF-β1、p-Smad3、ACE、Ang Ⅱ 及 AT1R 蛋白表达量增加（P<0.05）,E-cadherin、ACE2 及 MasR 蛋白表达量均减少（P<0.05）;与雄鼠HS组比,雌鼠HS组Ang（1-7）含量增多（P<0.05）,COLⅢ、Kim-1、ACE、Ang Ⅱ 及 AT1R 蛋白表达量减少（P<0.05）,ACE2 及 MasR 蛋白表达量增多（P<0.05）。（2）在成年组（16-18w）C57BL/6J小鼠中:实验第3周,与雄鼠NS组比,雄鼠HS组尾动脉收缩压升高（P<0.05）。与同性别NS组比,HS组小鼠血尿素氮、24h mALB、24h尿钠、24h尿钾及24h尿钠/钾均比升高（P<0.05）。与同性别NS组小鼠比,HS组小鼠肾小球硬化指数、肾小球纤维化指数及肾间质纤维化指数均升高（P<0.05）;与雄鼠HS相比,雌鼠HS组肾小球硬化指数、肾小球纤维化指数及肾间质纤维化指数均减少（P<0.05）。雌鼠血清雌激素含量均高于雄鼠。与同性别NS组比,HS 组小鼠 Ang（1-7）含量减少,COL Ⅰ、COL Ⅲ、Kim-1、α-SMA、Vimentin、TGF-β1、p-Smad3、ACE、Ang Ⅱ 及 AT1R 蛋白表达量增加（P<0.05）,E-cadherin、ACE2 及 MasR蛋白表达量均减少（P<0.05）;与雄鼠HS组比,雌鼠HS组Ang（1-7）含量增多（P<0.05）,COL Ⅰ、COL Ⅲ、Kim-1、α-SMA、Vimentin、TGF-β1、p-Smad3、ACE、Ang Ⅱ 及AT1R蛋白表达量减少（P<0.05）,E-cadherin,ACE2及MasR蛋白表达量增多（P<0.05）。结论:（1）短期高盐饮食可通过血压依赖途径或非血压依赖途径诱导C57BL/6J小鼠肾脏纤维化的发生;（2）肾小管-上皮间充质转化参与了短期高盐诱导C57BL/6J小鼠肾脏纤维化的病理过程;（3）TGF-β1/Smads通路和肾脏局部肾素-血管紧张素系统的激活参与短期高盐诱导C57BL/6J小鼠肾脏纤维化的发生机制;（4）短期高盐致小鼠肾脏纤维化的发生与其年龄和性别密切相关,以雄性、成年小鼠更加明显,其机制可能与雌鼠体内ACE2-Ang（1-7）-Mas受体轴的激活,抑制ACE-Ang Ⅱ-AT1R经典轴有关。
完颜萍萍[9]（2020）在《慢性间歇性缺氧对肾脏纤维化的影响及相关机理研究》文中研究指明目的:阻塞性睡眠呼吸暂停低通气综合征（Obstructive sleep apnea hypopnea syndrome,OSAHS）可引起呼吸暂停反复出现,且多为动脉氧饱和度降低。研究表明,OSAHS引起的心血管和靶器官损伤来源于间歇性缺氧。缺氧可对众多组织造成损伤。临床研究和动物实验均表明OSAHS可引起机体发生炎症反应,并可通过激活机体肾素-血管紧张素系统,介导慢性肾脏疾病（Chronic kidney diaelace,CKD）的发展,其引起的病理变化为肾脏组织的纤维化。目前为止,OSAHS是如何引起肾脏纤维化的具体作用机制还尚未研究清楚。因此,本研究拟采用慢性间歇性缺氧大鼠模型和细胞模型来初步探讨缺氧在肾脏纤维化进展中的作用及其可能机制。方法:1、模型建立及纤维化相关指标的检测:模拟OSAHS的发病特点,建立慢性间歇性缺氧大鼠模型,实验分组为:正常对照组（NC组）、轻度间歇性缺氧组（CIH 1组）、中度间歇性缺氧组（CIH 2组）和重度间歇性缺氧组（CIH 3组）。各实验组大鼠血清中TNF-α、IL-1β、IL-6和MCP-1水平通过Elisa法进行检测;各实验组大鼠肾脏组织病理学变化和胶原分布分别通过HE染色和MAsson染色方法进行观察;CD3和CD68表达通过免疫组化的方法进行检测;α-SMA、IL-1β、Col I和FN表达通过免疫荧光法进行检测;MCP-1、MIP-1β、Col I、FN、TNF-α和IL-1βm RNA表达通过RT-PCR的方法进行检测;MCP-1、MIP-1、Caspase-1和TNF-α蛋白表达通过Western blot的方法检测;2、采用转录组测序技术对正常大鼠和慢性间歇性缺氧模型大鼠肾脏组织进行测序,根据测序结果,筛选出差异表达基因、并对其进行GO功能和KEGG通路富集分析,进一步获得与纤维化相关的差异表达基因,并且通过RT-PCR方法验证其表达水平;3、通过HK-2细胞构建缺氧损伤模型,通过MTT法对细胞活力进行检测,通过Western blot的方法对各组细胞中Aqp1和HIF-1α蛋白表达变化进行检测;通过免疫组化Aqp1在慢性间歇性缺氧诱导的大鼠肾脏组织中的表达进行检测;4、通过对转录组测序数据分析得到Aqp1在慢性间歇性缺氧诱导的大鼠肾脏组织中显着上调,选择该靶基因进行以下研究:TGF-β诱导HK-2细胞纤维化模型,构建Aqp1干扰载体并转染HK-2细胞,转染后的HK-2细胞活力利用MTT进行检测;HK-2细胞中TNF-α、IL-1β、α-SMA和FN m RNA的表达水平利用RT-PCR法检测进行检测;采用免疫荧光技术检测E-cadherin、Fsp1和Vimentin的表达;同时利用western blot对细胞中E-cadherin、Vimentin、Erk、p-Erk和Aqp1等蛋白的表达变化进行检测。结果:（1）Elisa实验结果表明,与NC组比较,CIH 1组大鼠血清中IL-1β、TNF-α、IL-6、MCP-1和IFN-γ含量未见明显变化,CIH 2组和CIH 3组IL-1β、TNF-α、IL-6、MCP-1和IFN-γ含量明显增加,并且随着缺氧程度的加深,其含量增加越显着;（2）HE染色结果表明,与NC组比较,CIH 1组大鼠肾脏组织未发生明显病理学损伤,CIH 2组大鼠肾脏组织出现轻微损伤,CIH 3组大鼠肾脏组织损伤加重;Masson染色结果表明,与NC组比较,CIH组肾小管周围出现胶原沉积现象,并且随着缺氧程度的加深,胶原沉积越多;（3）免疫组化染色结果表明,与NC组比较,CIH 1组、CIH 2组和CIH 3组大鼠肾脏组织中CD3、CD68、FN和Col I表达均增加,并且随着缺氧程度的加深,其表达水平升高越显着;（4）免疫荧光结果表明,与NC组比较,CIH 1组、CIH 2组和CIH 3组大鼠肾脏组织中IL-1β和α-SMA表达均增加,并且随着缺氧程度的加深,其表达水平升高越显着;（5）RT-PCR结果表明,与NC组比较,CIH 1组、CIH 2组和CIH 3组大鼠肾脏组织中MCP-1、MIP-1β、Col I、FN、TNF-α和IL-1βm RNA表达均增加,并且随着缺氧程度的加深,其表达水平升高越显着;Western blot结果表明,与NC组比较,CIH 1组、CIH 2组和CIH 3组大鼠肾脏组织中MCP-1、MIP-1β、Caspase-1和TNF-α蛋白表达水平表达均增加,并且随着缺氧程度的加深,其表达水平升高越显着;（6）RNA-seq结果表明,较NC组比较,CIH组大鼠肾脏组织中有20个差异表达基因,其中13个显着上调、7个显着下调;结合现有文献,发现Fos、Erg1和Aqp1与肾脏纤维化相关,RT-PCR验证其m RNA在大鼠肾脏组织中的表达,结果与RNA-seq一致;此外,差异表达基因主要被注释到转录调节、血管发育、细胞增殖和细胞分化等GO功能;主要被注释到凋亡、近端小管重碳酸盐回收、肾素血管紧张素系统、钙吸收、肾素分泌等KEGG信号通路上;（7）成功建立HK-2细胞缺氧模型,与正常对照组比较,缺氧12 h、24 h和48 h后,HK-2细胞中HIF-1α和Aqp1蛋白表达均显着升高。对大鼠肾脏组织Aqp1表达水平进行检测,发现较NC组,CIH 1组、CIH 2组和CIH 3组Aqp1表达水平明显增加,并且随着缺氧程度的加深,其表达水平升高越显着;（8）TGF-β成功诱导HK-2细胞发生纤维化,转染Ad-si Aqp1腺病毒后,结果发现,较Model组比较,Aqp1干扰可抑制HK-2细胞增殖,细胞中E-cadherin表达明显升高,Fsp1和Vimentin表达明显降低;TNF-α、IL-1β、MCP-1、α-SMA和FN m RNA水平均显着降低;（9）Western blot实验结果表明,通过与Blank组进行比较,Model组HK-2细胞中蛋白Erk、p-Erk和Aqp1的表达水平升高;通过与Model组进行比较,Ad-si Aqp1组中蛋白Erk和p-Erk的表达水平不具有统计学差异,Vimentin和Aqp1的蛋白水平降低,E-Caherin蛋白水平升高;Ad-si Aqp1+PD98059组、PD98059组的Vimentin、Erk、p-Erk和Aqp1等蛋白水平均降低,E-Cadherin蛋白水平升高;与Ad-si Aqp1组进行比较,Ad-si Aqp1+PD98059组中蛋E-Caherin蛋白水平升高,Erk、p-Erk、Aqp1和Vimentin等的蛋白水平降低;与Ad-si Aqp1+PD98059组进行比较,PD98059组中蛋白E-Caherin蛋白水平降低,Aqp1和Vimentin蛋白水平升高,Erk和p-Erk蛋白水平没有差异。结论:（1）慢性间歇性缺氧可引起大鼠肾脏组织发生纤维化;（2）慢性间歇性缺氧可引起大鼠肾脏组织中基因表达发生改变,其中Fos、Aqp1和Egr1基因与肾脏纤维化关系密切;（3）Aqp1参与TGF-β诱导的HK-2细胞EMT过程;（4）Erk/Aqp1信号通路参与HK-2细胞纤维化发展。
汪之玉[10]（2020）在《参芪延肾颗粒治疗慢性肾脏病3-4期的临床疗效观察》文中研究表明目的:观察参芪延肾颗粒治疗慢性肾脏病（CKD）3-4期脾肾气虚证兼湿浊证或（和）血瘀证患者的临床疗效及安全性。方法:选择2018年12月至2019年8月期间重庆市中医院肾病科门诊和住院符合纳入标准的患者72例,随机分为观察组、对照组,各36例。两组均予西医基础治疗,观察组加用参芪延肾颗粒冲服,两组均治疗12周。观察比较治疗前后中医证候量化评分、肾功能（Scr、BUN、e GFR）、肾小管功能（NAG、NGAL）、24h UPro、Alb、Hb和安全性指标,用SPSS26.0统计软件进行统计分析。结果:1、两组中医证候比较:观察组总有效率85.29%,对照组总有效率40.63%,差异有显着统计学意义（P<0.01）;两组治疗前后中医证候积分及主症积分差异均有显着统计学意义（P<0.01）,但观察组较对照组下降明显（P<0.01）;2、两组肾功能比较:观察组Scr较前明显下降（P<0.01）,对照组Scr较前下降（P<0.05）,治疗后组间比较差异有统计学意义（P<0.05）;两组e GFR均较前升高（P<0.01）,但观察组升高明显,差异具有统计学意义（P<0.05）;两组BUN均较前下降（P<0.01）,但观察组下降显着,差异具有统计学意义（P<0.01）;3、两组肾小管功能比较:NGAL、NAG较前均明显下降（P<0.01）,但观察组下降明显,差异均具有显着统计学意义（P<0.01）;4、两组24h UPro、Hb、Alb比较:两组24h UPro均较前下降（P<0.01）,但观察组下降明显,差异有显着统计学意义（P<0.01）;两组Hb均较前升高（P<0.01）,两组治疗后差异无统计学意义（P>0.05）;两组Alb均较前升高,观察组差异有显着统计学意义（P<0.01）,对照组差异有统计学意义（P<0.05）,治疗后组间比较差异有显着统计学意义（P<0.01）;5、两组临床疗效比较:观察组有效率达85.29%,对照组有效率40.63%,差异有显着统计学意义（P<0.01）。结论:参芪延肾颗粒治疗慢性肾脏病3-4期脾肾气虚证兼湿浊证或（和）血瘀证患者临床疗效确切,能改善中医证候、肾功能、肾小管功能,同时降低24小时尿蛋白定量、提高血浆白蛋白水平,延缓CKD向终末期进展;且安全性高。
二、肾脏纤维化的研究进展（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、肾脏纤维化的研究进展（论文提纲范文）
（1）中医药防治糖尿病肾病肾脏纤维化的研究进展（论文提纲范文）
| 一、中西医对于本病的认识 |
| 1.现代医学对于DN肾脏纤维化的认识 |
| 2.中医学对于本病的认识 |
| 二、关于防治DN肾脏纤维化的中医治法理论 |
| 三、部分单味中药防治DN肾脏纤维化的药理研究 |
| 1.补益药 |
| 2.清热药 |
| 3.活血化瘀药 |
| 4.祛风药 |
| 四、中药复方制剂防治DN肾脏纤维化研究 |
| 五、问题与展望 |
（2）芪黄四物汤通过调控miRNA-mRNA共表达网络改善肾脏纤维化的机制研究（论文提纲范文）
| 提要 |
| abstract |
| 引言 |
| 第一部分 理论探讨 |
| 1.祖国医学对CKD与RF的认识 |
| 1.1 历代经典中CKD与RF的论述 |
| 1.2 现代医家对CKD与RF的认识 |
| 2.西方医学对RF的认识 |
| 2.1 ECM受体相互作用与RF |
| 2.2 TGF-β/SMAD通路与RF |
| 2.3 内质网应激与RF |
| 2.4 氧化应激与RF |
| 2.5 微炎症与RF |
| 2.6 脂肪酸代谢与RF |
| 2.7 肾小管上皮细胞EMT与RF |
| 2.8 MiRNA与 RF |
| 第二部分 临床研究 |
| 1 研究目的 |
| 2 研究对象及来源 |
| 3 CKD诊断及分期标准 |
| 3.1 CKD诊断标准 |
| 3.2 CKD分期标准 |
| 4 中医辨证标准 |
| 5 病例选择标准 |
| 5.1 纳入标准 |
| 5.2 排除标准 |
| 5.3 脱落标准 |
| 6 研究设计 |
| 6.1 样本量估计 |
| 6.2 试验分组 |
| 6.3 治疗方案 |
| 6.4 治疗疗程 |
| 6.5 观察指标及方法 |
| 7 疗效评定标准 |
| 7.1 临床总疗效评定标准 |
| 7.2 中医证候疗效评定标准 |
| 7.3 安全性评定标准 |
| 8 统计学方法 |
| 9 试验结果 |
| 9.1 两组患者性别、年龄、病程比较 |
| 9.2 两组患者原发病、CKD分期比较 |
| 9.3 两组患者Scr、BUN、UA及 eGFR比较 |
| 9.4 两组患者UACR、β2-MG及 NAG比较 |
| 9.5 两组患者HGB、血钙、血磷及PTH比较 |
| 9.6 两组患者血清TGF-β1、SOD及 IL-6比较 |
| 9.7 两组患者中医证候积分的比较 |
| 9.8 两组患者中医证候疗效的比较 |
| 9.9 两组患者临床总疗效的比较 |
| 9.10 安全性指标分析 |
| 第三部分 动物实验 |
| 实验一 芪黄四物汤对环孢素A(CsA)诱导的肾脏纤维化(RF)小鼠的肾脏保护作用 |
| 1 实验目的 |
| 2 实验材料 |
| 2.1 实验动物 |
| 2.2 药品与试剂 |
| 2.3 仪器及耗材 |
| 3 实验方法 |
| 3.1 动物分组及给药 |
| 3.2 样品收集与准备 |
| 3.3 一般情况、肾功能、炎症及氧化应激相关代谢物的测定 |
| 3.4 HE染色 |
| 3.5 Masson染色 |
| 3.6 PAS染色 |
| 3.7 TUNEL凋亡实验 |
| 3.8 统计学方法 |
| 4 实验结果 |
| 4.1 芪黄四物汤对小鼠一般情况、体质量及24h尿量的影响 |
| 4.2 芪黄四物汤对小鼠血清Scr、BUN、UA的影响 |
| 4.3 芪黄四物汤对小鼠尿液UACR、NAG的影响 |
| 4.4 芪黄四物汤对小鼠血清IL-6、MDA的影响 |
| 4.5 芪黄四物汤对小鼠肾组织病理的影响 |
| 4.6 芪黄四物汤对小鼠肾组织细胞凋亡的影响。 |
| 实验二 芪黄四物汤对RF小鼠miRNA-mRNA共表达网络的调控作用 |
| 1 实验目的 |
| 2 实验材料 |
| 2.1 药品与试剂 |
| 2.2 仪器及耗材 |
| 3 实验方法 |
| 3.1 miRNA与 mRNA测序 |
| 3.2 DE mRNAs和 DE miRNAs的关联分析 |
| 3.3 靶miRNA的 qRT-PCR验证 |
| 3.4 靶mRNA的 qRT-PCR验证 |
| 3.5 Western Blot |
| 3.6 免疫荧光 |
| 3.7 肾组织ELISA |
| 3.8 统计学分析 |
| 4 实验结果 |
| 4.1 差异miRNAs的筛选及芪黄四物汤的干预作用 |
| 4.2 芪黄四物汤调控的靶miRNAs的筛选 |
| 4.3 芪黄四物汤调控的靶miRNAs的 qRT-PCR验证 |
| 4.4 差异mRNAs的筛选及芪黄四物汤的干预作用 |
| 4.5 DE miRNAs和 DE mRNAs共表达网络的构建 |
| 4.6 DE miRNAs-DE mRNAs共表达基因的KEGG富集 |
| 4.7 芪黄四物汤调控ECM-receptor interaction通路改善RF |
| 4.8 芪黄四物汤通过调控CD44、MMP2、SPP1改善RF |
| 4.9 芪黄四物汤通过调控TGF-beta signaling pathway改善RF |
| 4.10 芪黄四物汤通过调控内质网应激(ERS)改善RF |
| 4.11 芪黄四物汤通过调控脂肪酸代谢改善RF |
| 4.12 芪黄四物汤通过调控线粒体氧化应激改善RF |
| 第四部分 细胞实验 芪黄四物汤通过miR-21-5p/SMAD7轴对CsA诱导的人肾小管上皮细胞(HKC)上皮间充质转分化(EMT)的影响 |
| 1 实验目的 |
| 2 实验材料 |
| 2.1 细胞株 |
| 2.2 药品与试剂 |
| 2.3 仪器与耗材 |
| 3 实验方法 |
| 3.1 细胞培养 |
| 3.2 实验用药物和试剂的配制 |
| 3.3 细胞增殖功能检测(MTT) |
| 3.4 细胞凋亡实验 |
| 3.5 Transwell细胞迁移功能检测 |
| 3.6 mRNA的 qRT-PCR检测 |
| 3.7 miRNA的 qRT-PCR检测 |
| 3.8 Western Blot |
| 3.9 细胞转染 |
| 3.10 统计学方法 |
| 4 实验结果 |
| 4.1 CsA对 HKC增殖的影响及芪黄四物汤的调控作用 |
| 4.2 芪黄四物汤对CsA诱导的HKC凋亡的影响 |
| 4.3 芪黄四物汤对CsA诱导的HKC迁移的影响 |
| 4.4 芪黄四物汤对CsA诱导的HKC E-cadherin、a-SMA表达的影响 |
| 4.5 芪黄四物汤对CsA诱导的HKC TGF-β1、SMAD3、SMAD7表达的影响 |
| 4.6 芪黄四物汤对CsA诱导的HKC miR-21-5p、miR-375-3p、miR-802表达的影响 |
| 4.7 芪黄四物汤通过调控miR-21-5p对 CsA诱导的HKC SMAD7、a-SMA、E-cadherin的影响 |
| 4.8 芪黄四物汤调控miR-21-5p对 CsA诱导的HKC迁移的影响 |
| 讨论 |
| 1 导师对CKD与RF病因病机的认识 |
| 1.1 脾肾亏虚乃CKD与RF发生的基础 |
| 1.2 血瘀贯穿CKD及RF的始终 |
| 1.3 湿热浊毒是CKD与RF的重要环节 |
| 2 芪黄四物汤的立法组方及药理分析 |
| 2.1 导师治疗CKD立法组方的思路 |
| 2.2 芪黄四物汤的组成及配伍分析 |
| 2.3 芪黄四物汤各单味药抗RF的现代药理研究 |
| 3 临床研究分析 |
| 3.1 芪黄四物汤改善肾功能、肾小球及肾小管-间质损伤 |
| 3.2 芪黄四物汤改善肾性贫血、钙磷代谢紊乱及PTH |
| 3.3 芪黄四物汤改善机体纤维化、氧化应激及微炎症状态 |
| 3.4 芪黄四物汤改善中医证候积分、中医证候疗效及临床总疗效 |
| 3.5 芪黄四物汤治疗CKD安全有效 |
| 4 动物实验分析 |
| 4.1 RF动物实验模型的选择 |
| 4.2 芪黄四物汤改善肾脏病理损伤及肾功能 |
| 4.3 芪黄四物汤调控紊乱的miRNA-mRNA共表达网络改善RF |
| 5 细胞实验分析 |
| 5.1 芪黄四物汤可有效抑制EMT |
| 5.2 芪黄四物汤可能通过调控miR-21-5p/SMAD7轴抑制EMT |
| 结语 |
| 参考文献 |
| 综述 miR-21、miR-29与肾脏纤维化关系的研究进展 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 致谢 |
| 查新报告 |
| 论文着作 |
| 附件 |
（3）盐酸小檗碱对小鼠UUO模型诱导的肾脏纤维化的保护作用及其相关机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 常用缩写词中英文对照表 |
| 前言 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 实验材料 |
| 1.1.1 实验动物 |
| 1.1.2 主要试剂及所需溶液的配制 |
| 1.1.2.1 主要试剂 |
| 1.1.2.2 主要溶液的配制 |
| 1.1.3 仪器设备 |
| 1.2 实验方法 |
| 1.2.1 实验动物分组及饲养 |
| 1.2.2 UUO模型的建立 |
| 1.2.3 实验动物干预 |
| 1.2.4 实验动物取材 |
| 1.2.5 检测内容及方法 |
| 1.3 统计学分析 |
| 2 结果 |
| 2.1 各组小鼠一般情况比较 |
| 2.2 肾脏组织FN、Col-Ⅰ、Col-Ⅲ表达水平 |
| 2.2.1 FN表达水平情况 |
| 2.2.2 Col-Ⅰ表达水平情况 |
| 2.2.3 Col-Ⅲ表达水平情况 |
| 2.3 各组小鼠肾脏组织病理形态改变 |
| 2.3.1 HE染色 |
| 2.3.2 Masson染色 |
| 2.3.3 免疫组化 |
| 2.4 小檗碱对肾脏纤维化改善机制的研究 |
| 2.4.1 小檗碱对肾脏组织α-SMA及E-cadherin表达水平的影响 |
| 2.4.2 小檗碱对肾脏组织IL-1β表达水平的影响 |
| 3 讨论 |
| 3.1 UUO模型与肾脏纤维化 |
| 3.2 肾脏纤维化的病理过程及机制 |
| 3.3 盐酸小檗碱与肾脏纤维化 |
| 3.4 实验不足之处 |
| 3.5 展望 |
| 4 结论 |
| 参考文献 |
| 综述 松弛素在肾脏纤维化中作用机制及研究进展 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 个人简介 |
（4）功能磁共振对慢性肾脏病患者肾脏纤维化状态的评估及多模态模型的建立（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 缩略词表 |
| 研究一: 功能磁共振在评估慢性肾脏病患者肾功能状态中的研究 |
| 一、前言 |
| 二、对象和方法 |
| 三、结果 |
| 四、讨论 |
| 五、小结 |
| 六、参考文献 |
| 研究二: 功能磁共振在评估慢性肾脏病患者肾组织纤维化中的研究 |
| 一、前言 |
| 二、对象和方法 |
| 三、结果 |
| 四、讨论 |
| 五、小结 |
| 六、参考文献 |
| 研究三:基于功能磁共振、肾脏功能及肾组织病理学参数的多模态模型的建立 |
| 一、前言 |
| 二、对象和方法 |
| 三、结果 |
| 四、讨论 |
| 五、小结 |
| 六、参考文献 |
| 全文总结 |
| 文献综述 慢性肾脏病纤维化评估的影像学研究进展 |
| 参考文献 |
| 在读期间发表论文和参加科研工作情况 |
| 致谢 |
（5）基于肝肾同源探讨芪地糖肾方干预DN小鼠纤维化及胆汁酸的研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 符号说明 |
| 第一部分 文献综述 |
| 综述一 糖尿病肾脏病与肝、肾关系的西医研究进展 |
| 1 糖尿病与肝脏的关系 |
| 2 胆汁酸和FXR的研究进展 |
| 3 纤维化与胆汁酸及糖尿病肾病关系的研究 |
| 参考文献 |
| 综述二 糖尿病肾病与肝肾相关中医研究进展 |
| 1 古代文献对“肝”、“肾”相关以及和消渴病肾病关系的论述 |
| 2 现代中医学肝肾相关研究及其在糖尿病肾脏病中的应用 |
| 3 胆汁酸和FXR与中医相关研究进展 |
| 4 纤维化与中医相关研究进展 |
| 参考文献 |
| 前言 |
| 第二部分 临床研究 基于肝肾同源理论探讨糖尿病肾脏病胆汁酸及纤维化因子与中医证素的相关性研究 |
| 1 研究对象 |
| 2 研究方法 |
| 3 研究结果 |
| 4 讨论 |
| 参考文献 |
| 第三部分 实验研究 |
| 实验一 芪地糖肾方对db/db糖尿病肾病小鼠模型肾脏纤维化因子的干预研究 |
| 1 实验方案 |
| 2 实验结果 |
| 讨论 |
| 参考文献 |
| 实验二 芪地糖肾方对db/db糖尿病肾病小鼠模型胆汁酸通路影响的研究 |
| 1 实验方案 |
| 2 实验结果 |
| 讨论 |
| 参考文献 |
| 实验三 db/db糖尿病肾病小鼠模型胆汁酸成分与纤维化因子相关性的研究 |
| 1 实验方案 |
| 2 实验结果 |
| 讨论 |
| 结语 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 附录 中医证候评定表 |
| 个人简介 |
（6）糖肾方改善糖尿病肾脏纤维化和氧化应激损伤的机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 符号说明 |
| 文献综述一 LncRNA在DKD肾脏纤维化中的研究进展 |
| 参考文献 |
| 文献综述二 中药改善DKD氧化应激损伤的研究进展 |
| 参考文献 |
| 前言 |
| 第一章 基于网络药理学探讨糖肾方治疗DKD肾脏纤维化的机制 |
| 一、实验材料与方法 |
| 二、实验结果 |
| 三、讨论 |
| 第二章 糖肾方治疗单侧肾切除合并STZ注射诱导的DKD大鼠的疗效观察 |
| 一、实验材料与方法 |
| 二、实验结果 |
| 三、讨论 |
| 第三章 糖肾方通过调控TGFβ1/Smad3和LncRNA MEG3改善DKD肾脏纤维化的机制研究 |
| 一、实验材料与方法 |
| 二、实验结果 |
| 三、讨论 |
| 第四章 糖肾方通过调控Keap1/Nrf2减轻DKD氧化应激损伤的机制研究 |
| 一、实验材料与方法 |
| 二、实验结果 |
| 三、讨论 |
| 结语 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
| 在学期间主要研究成果 |
（7）慢性肾脏病患者血清低氧诱导因子-1α水平及其与肾脏纤维化的关系（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| abstract |
| 中英文缩略词对照表 |
| 第1章 前言 |
| 第2章 综述 低氧诱导因子-1α与肾脏纤维化关系的研究进展 |
| 2.1 慢性肾脏病的概述 |
| 2.2 肾脏纤维化的发生机制 |
| 2.3 低氧诱导因子的概述 |
| 2.3.1 低氧诱导因子的组成 |
| 2.3.2 低氧诱导因子的调节 |
| 2.3.3 低氧诱导因子的生物学效应 |
| 2.4 低氧诱导因子对肾脏纤维化的影响机制 |
| 2.4.1 低氧诱导因子-1α和肾性贫血 |
| 2.4.2 低氧诱导因子-1α和炎症反应 |
| 2.4.3 低氧诱导因子-1α和上皮-间充质转化 |
| 2.4.4 低氧诱导因子-1α调控下游靶基因转录 |
| 2.4.5 低氧诱导因子-1α和促纤维化信号通路 |
| 2.5 总结与展望 |
| 第3章 材料与方法 |
| 3.1 研究对象及分组 |
| 3.1.1 纳入病例入选标准 |
| 3.1.2 纳入病例排除标准 |
| 3.2 主要实验仪器及试剂 |
| 3.2.1 主要实验仪器 |
| 3.2.2 主要试剂 |
| 3.3 研究方法 |
| 3.3.1 一般及临床资料 |
| 3.3.2 诊断标准 |
| 3.3.3 标本收集与检测 |
| 3.4 统计学方法 |
| 第4章 结果 |
| 4.1 一般资料比较 |
| 4.2 临床资料比较 |
| 4.3 血清纤维化指标比较 |
| 4.4 血清低氧诱导因子-1α水平变化 |
| 4.5 血清低氧诱导因子-1α水平与临床资料相关性分析 |
| 4.6 血清低氧诱导因子-1α水平与纤维化指标相关性分析 |
| 4.6.1 HIF-1α水平与TGF-β1 相关性 |
| 4.6.2 HIF-1α水平与α-SMA相关性 |
| 第5章 讨论 |
| 第6章 结论 |
| 参考文献 |
| 作者简介及在学期间所取得的科研成果 |
| 致谢 |
（8）短期高盐饮食对不同年龄、性别C57BL/6J小鼠肾脏纤维化的影响及机制研究（论文提纲范文）
| 中英缩略词对照表 |
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 综述 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 作者简介 |
（9）慢性间歇性缺氧对肾脏纤维化的影响及相关机理研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 缩略词表 |
| 第一章 前言 |
| 1.1 阻塞性睡眠呼吸暂停低通气综合征 |
| 1.1.1 OSAHS定义和主要临床表现 |
| 1.1.2 流行病学 |
| 1.1.3 高危因素 |
| 1.1.4 并发症 |
| 1.2 肾脏纤维化 |
| 1.2.1 肾脏纤维化的病因学和病理生理学 |
| 1.2.2 肾脏纤维化和炎症反应 |
| 1.2.3 肾脏纤维化和TGF-β信号 |
| 1.2.4 肾脏纤维化对人类健康的影响 |
| 1.3 研究目的及意义 |
| 第二章 慢性间歇性缺氧对大鼠肾脏纤维化的影响 |
| 2.1 实验材料 |
| 2.1.1 实验动物 |
| 2.1.2 主要试剂 |
| 2.1.3 主要仪器 |
| 2.2 实验方法 |
| 2.2.1 OSAHS大鼠模型建立 |
| 2.2.2 Elisa实验 |
| 2.2.3 HE染色 |
| 2.2.4 Masson染色 |
| 2.2.5 免疫组织化学 |
| 2.2.6 免疫荧光 |
| 2.2.7 RT-PCR |
| 2.2.8 Western blot |
| 2.2.9 统计学分析 |
| 2.3 结果 |
| 2.3.1 慢性间歇性缺氧对大鼠体重的影响 |
| 2.3.2 慢性间歇性缺氧对大鼠血清IFN-γ、TNF-α、MCP-1、IL-1β和IL-6水平的影响 |
| 2.3.3 慢性间歇性缺氧对大鼠肾组织病理学变化的影响 |
| 2.3.4 慢性间歇性缺氧对大鼠肾脏组织胶原沉积的影响 |
| 2.3.5 慢性间歇性缺氧对大鼠肾脏组织中Col I、FN、CD3和CD68 蛋白表达的影响 |
| 2.3.6 慢性间歇性缺氧对IL-1β和α-SMA蛋白表达的影响 |
| 2.3.7 慢性间歇性缺氧对MCP-1、MIP-1β、Col I、FN、TNF-α和IL-1βmRNA表达的影响 |
| 2.3.8 慢性间歇性缺氧对MCP-1、MIP-1β、Caspase-1和TNF-α蛋白表达的影响 |
| 2.4 讨论 |
| 第三章 慢性间歇性缺氧大鼠肾脏组织转录组表达谱分析 |
| 3.1 实验材料 |
| 3.1.1 实验动物 |
| 3.1.2 主要试剂 |
| 3.1.3 主要仪器 |
| 3.2 实验方法 |
| 3.2.1 组织准备 |
| 3.2.2 总RNA提取及检测 |
| 3.2.3 RNA的处理与测序 |
| 3.2.4 差异基因分析 |
| 3.2.5 差异基因GO功能和KEGG Pathway分析 |
| 3.2.6 RT-PCR |
| 3.2.7 统计学分析 |
| 3.3 结果 |
| 3.3.1 测序数据整理及质量评估 |
| 3.3.2 转录组测序与参比基因序列比对 |
| 3.3.3 测序数据饱和度检验 |
| 3.3.4 差异表达基因筛选 |
| 3.3.5 差异表达基因GO分析 |
| 3.3.6 差异表达基因KEGG Pathway分析 |
| 3.3.7 差异表达基因的RT-PCR验证 |
| 3.4 讨论 |
| 第四章 Aqp1与肾脏缺氧的关系 |
| 4.1 实验材料 |
| 4.1.1 细胞株 |
| 4.1.2 实验试剂 |
| 4.1.3 主要仪器 |
| 4.2 实验方法 |
| 4.2.1 细胞复苏 |
| 4.2.2 细胞传代 |
| 4.2.3 细胞缺氧处理 |
| 4.2.4 Western blot |
| 4.2.5 MTT |
| 4.2.6 免疫组化 |
| 4.2.7 统计学分析 |
| 4.3 结果 |
| 4.3.1 缺氧对HK-2细胞形态的影响 |
| 4.3.2 缺氧对HK-2 细胞HIF-1α和 Aqp1 蛋白表达的影响 |
| 4.3.3 缺氧对HK-2细胞活性的影响 |
| 4.3.4 缺氧对大鼠肾脏组织中Aqp蛋白表达的影响 |
| 4.4 讨论 |
| 第五章 Aqp1在肾小管上皮间质转化中的潜在作用及机制研究 |
| 5.1 实验材料 |
| 5.1.1 细胞株 |
| 5.1.2 主要试剂 |
| 5.1.3 主要仪器 |
| 5.2 实验方法 |
| 5.2.1 Aqp1腺病毒病毒载体构建 |
| 5.2.2 细胞纤维化模型建立 |
| 5.2.3 细胞转染 |
| 5.2.4 MTT |
| 5.2.5 RT-PCR |
| 5.2.6 免疫荧光 |
| 5.2.7 Western blot |
| 5.2.8 统计学分析 |
| 5.3 结果 |
| 5.3.1 细胞感染效率 |
| 5.3.2 Aqp1干扰对HK-2细胞增殖的影响 |
| 5.3.3 Aqp1 干扰对HK-2 细胞TNF-α、IL-1β、α-SMA和 FN m RNA表达的影响 |
| 5.3.4 Aqp1 干扰对HK-2 细胞E-Cadherin、Fsp1和Vimentin表达的影响 |
| 5.3.5 ERK/Aqp1 信号抑制对HK-2 细胞Aqp1 表达和EMT的影响 |
| 5.4 讨论 |
| 第六章 结论 |
| 6.1 主要结论 |
| 6.2 研究展望 |
| 参考文献 |
| 在校期间的研究成果 |
| 致谢 |
（10）参芪延肾颗粒治疗慢性肾脏病3-4期的临床疗效观察（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 英文缩略词表 |
| 引言 |
| 第一部分 资料与方法 |
| 1 临床资料 |
| 1.1 研究对象 |
| 1.2 诊断标准 |
| 1.3 纳入标准 |
| 1.4 排除标准 |
| 1.5 剔除标准 |
| 1.6 脱落标准 |
| 2 研究方法 |
| 2.1 病例完成情况及一般资料 |
| 2.2 治疗方法 |
| 2.4 观察指标 |
| 2.5 疾病疗效评定 |
| 2.6 安全性评价标准 |
| 2.7 统计学处理 |
| 第二部分 结果与分析 |
| 1 研究结果 |
| 1.1 两组治疗前后中医证候积分比较 |
| 1.2 两组治疗后中医证候疗效比较 |
| 1.3 两组治疗前后肾功能比较 |
| 1.4 两组治疗前后肾小管功能比较 |
| 1.5 两组治疗前后24h UPro、Alb、Hb比较 |
| 1.6 两组治疗后临床疗效比较 |
| 2 安全性评价 |
| 第三部分 讨论与分析 |
| 1 西医学对慢性肾脏病的认识 |
| 1.1 对病因、发病机制的认识 |
| 1.2 西医对慢性肾脏病的治疗现状 |
| 2 中医学对慢性肾脏病的认识 |
| 2.1 对病名的认识 |
| 2.2 对病因病机的认识 |
| 2.3 中医对慢性肾脏病的治疗 |
| 3 参芪延肾颗粒的理论依据 |
| 3.1 郑新国医大师的理论基础、前期研究 |
| 3.2 本方的立法处方原则 |
| 3.3 本方单味药的现代药理学研究 |
| 4 研究结果分析 |
| 4.1 临床疗效分析 |
| 4.2 中医证候积分疗效分析 |
| 4.3 肾功能疗效分析 |
| 4.4 24小时尿蛋白定量、血浆白蛋白、血红蛋白疗效分析 |
| 4.5 肾小管功能疗效分析 |
| 5 问题与展望 |
| 第四部分 结论 |
| 致谢 |
| 参考文献 |
| 附录A:病例观察表 |
| 附录B:中医证候分级量化表 |
| 附录C:文献综述 中医药延缓肾脏纤维化的治疗进展 |
| 参考文献 |
四、肾脏纤维化的研究进展（论文参考文献）
- [1]中医药防治糖尿病肾病肾脏纤维化的研究进展[J]. 曹留洋,余海源. 临床肾脏病杂志, 2021(08)
- [2]芪黄四物汤通过调控miRNA-mRNA共表达网络改善肾脏纤维化的机制研究[D]. 韩聪. 山东中医药大学, 2021
- [3]盐酸小檗碱对小鼠UUO模型诱导的肾脏纤维化的保护作用及其相关机制研究[D]. 高智宏. 山西医科大学, 2021(01)
- [4]功能磁共振对慢性肾脏病患者肾脏纤维化状态的评估及多模态模型的建立[D]. 张炯. 中国人民解放军海军军医大学, 2021(01)
- [5]基于肝肾同源探讨芪地糖肾方干预DN小鼠纤维化及胆汁酸的研究[D]. 安至超. 北京中医药大学, 2021(01)
- [6]糖肾方改善糖尿病肾脏纤维化和氧化应激损伤的机制研究[D]. 周学锋. 北京中医药大学, 2021(01)
- [7]慢性肾脏病患者血清低氧诱导因子-1α水平及其与肾脏纤维化的关系[D]. 魏雪娇. 吉林大学, 2021(01)
- [8]短期高盐饮食对不同年龄、性别C57BL/6J小鼠肾脏纤维化的影响及机制研究[D]. 黄娟. 遵义医科大学, 2020
- [9]慢性间歇性缺氧对肾脏纤维化的影响及相关机理研究[D]. 完颜萍萍. 兰州大学, 2020(04)
- [10]参芪延肾颗粒治疗慢性肾脏病3-4期的临床疗效观察[D]. 汪之玉. 湖南中医药大学, 2020(03)