一、核苷N9705的抗病毒、抗菌杀虫活性研究（论文文献综述）
柯少勇,吴兆圆,万中义,方伟,张亚妮,王开梅[1]（2019）在《具有农药活性的微生物源核苷类化合物》文中进行了进一步梳理微生物天然产物在新农药的研究与开发中占据着重要的地位。核苷作为一类重要的生理活性物质,具有丰富多样的结构及生物活性。本文对微生物来源的具有农药活性的核苷类化合物进行总结,重点综述了具有农药活性的微生物源嘧啶或嘌呤、核苷及其衍生物及核苷酸类似物等三类微生物源核苷类化合物,分别对其来源、结构多样性、农药活性及杀虫、杀菌及抗病毒作用机制进行了概括,以期对新型农用抗生素的开发及新农药创制提供一些有益的借鉴。
王林松[2]（2019）在《松材线虫醇脱氢酶基因的生理功能研究》文中研究说明由松材线虫（Bursaphelenchus xylophilus）引起的松萎蔫病（pine wilt disease）是一种极具毁灭性的松林病害,在世界范围内引起了巨大的经济损失和严重的生态灾难。松材线虫引起松树死亡是一个复杂的过程,涉及松材线虫、宿主松树以及松材线虫的伴生菌。越来越多的研究表明,不同来源的松材线虫株系具有不同的致病性,某些松材线虫伴生菌对松材线虫的发育有一定的促进作用,但目前有关松材线虫发育与致病分子机制研究仍然不多。在前期研究中,通过分析携带荧光假单胞菌松材线虫以及无菌线虫转录组数据,筛选出可能与醇代谢密切相关的编码醇脱氢酶的上调差异表达基因adh-1。通过PCR技术克隆出松材线虫adh-1基因的开放阅读框（Open reading frame,ORF）,构建原核表达系统,获得可溶性重组醇脱氢酶并进行酶活测定分析,酶活测定结果表明,松材线虫醇脱氢酶对包含甲醇、乙醇以及正丙醇在内的多种醇都具有一定的催化活性,具有广泛地底物特异性。实时荧光定量PCR（Quantitative real-time PCR,qRT-PCR）的检测结果表明,环境中的乙醇可以显着引起其adh-1基因上调表达。上述结果表明,松材线虫adh-1基因所编码的蛋白确实为醇脱氢酶,并可以催化包含乙醇在内的多种醇的氧化反应;且在一定乙醇浓度下,环境中的乙醇与松材线虫adh-1基因表达量之间存在着相关性。在本次研究中,我们对松材线虫adh-1基因的基因结构以及生物信息学信息进行了进一步的分析,结果表明,编码松材线虫醇脱氢酶的adh-1基因全长1458 bp,其5’端包含一个长度为52 bp的非编码序列（Untranslated region,UTR）,3’端包含一个48 bp的非编码序列;松材线虫adh-1基因完整的ORF全长是1059 bp,编码352个氨基酸残基的蛋白;此外,松材线虫adh-1基因还包含3个长度分别为291,189和579 bp的外显子以及2个长度分别为92和206 bp的内含子,且内含子符合“GT-AG”的剪切原则。松材线虫醇脱氢酶氨基酸序列相似性分析的结果表明,松材线虫醇脱氢酶氨基酸序列与秀丽隐杆线虫（Caenorhabditis.elegans）以及布氏隐杆线虫（Caenorhabditis.briggsae）的醇脱氢酶相似度最高,相似度分别达到了55%和54%。SignalP 4.0和TMHMM server 2.0软件的信号肽以及跨膜结构预测结果表明,松材线虫醇脱氢酶并不包含信号肽序列以及跨膜结构域,说明该酶可能是一种胞内酶且不是跨膜蛋白。为了深入研究adh-1基因在松材线虫体内的生物学功能,本研究利用RNA干扰（RNA interference,RNAi）技术以降低adh-1的表达水平,并比较了RNA i线虫和对照线虫的性状差异。RNA干扰研究的结果表明,松材线虫adh-1基因被干扰（下调表达）后,松材线虫体内醇脱氢酶活力、对环境乙醇的耐受性、运动性、繁殖力以及对灰葡萄孢（Botrytis cinerea）的取食能力都出现显着降低;而醇脱氢酶抑制剂甲吡唑处理松材线虫后,松材线虫体内的醇脱氢酶活力、运动性、繁殖力以及对灰葡萄孢的取食能力也出现显着降低趋势。上述实验结果说明,松材线虫adh-1基因参与了对其运动性和繁殖力的调控。此外,我们还进一步研究了环境中低浓度乙醇与松材线虫adh-1基因表达量之间的关系,结果表明,松材线虫经0.1%、0.5%和1.0%浓度乙醇处理24 h后,其adh-1基因表达水平明显高于对照组中无菌水处理的松材线虫,分别是对照组的1.34、1.78和2.10倍。该结果说明,低浓度的乙醇可以诱导松材线虫adh-1基因的表达,且在一定乙醇浓度范围内,adh-1基因表达量随着乙醇浓度的增加而增高,这说明adh-1基因与松材线虫体内的乙醇代谢密切相关。为了了解甲吡唑对松材线虫的毒性,本研究测定了甲吡唑处理松材线虫24 h和48 h的LC50和LC90。结果表明,在24 h和48 h时,甲吡唑对松材线虫的LC50分别是0.026 mM和0.025 mM,LC90分别是0.040 mM和0.038 mM,在24 h和48h这两个时间点上,甲吡唑对松材线虫的LC50差异并不显着,这表明甲吡唑达到一定浓度时,该药物对松材线虫具有快速的致死作用;在甲吡唑处理松材线虫24 h时,0.055 mM甲吡唑溶液对松材线虫展现出了约100%的致死效果。上述关于甲吡唑对松材线虫毒性的研究结果将为杀松材线虫以及防控松萎蔫病药剂的开发和创新提供新的实验依据。为了深入研究甲吡唑影响松材线虫运动与繁殖的分子机制,在本研究中,我们利用Illumina测序技术对0.02 mM甲吡唑处理24 h的松材线虫（实验组）以及无菌水处理的松材线虫（对照组）的转录组进行了高通量测序,并通过深入分析转录组数据挖掘出调控松材线虫运动与繁殖的差异表达基因和代谢通路。NCBI NR、Gene Ontology（GO）以及Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes（KEGG）数据库对差异表达基因的功能注释结果表明,在甲吡唑处理组松材线虫中,共有3114个差异表达基因,其中包含2124个上调基因和490个下调基因,而差异倍数在2倍以上的差异表达基因共有367个,其中包括214个上调基因和153个下调基因（FDR<0.001）。一些具有潜在调节松材线虫运动性与繁殖能力的关键差异表达基因以及代谢通路在本研究中进行了详细的阐述,例如:MAPK信号途径中的有丝分裂活化蛋白激酶7（MAPK7）基因、热休克蛋白70（HSP70）基因和核糖体S6激酶（RSK）基因;核糖体中的40S核糖体蛋白S8-1基因、40S核糖体蛋白S12基因和40S核糖体蛋白S18基因;乙酰胆碱酯酶（AchE）基因。根据转录组数据以及所获得的差异基因的注释结果,从差异表达基因中随机选择7个基因,包括3个上调基因和4个下调基因,通过实时荧光定量PCR技术对其表达水平进行了验证,结果表明,随机筛选的差异基因的表达水平与转录组测序结果大体一致,证实了转录组数据结果的可靠性。此外,通过分析甲吡唑处理组松材线虫转录组数据,我们筛选到了影响线虫发育、寿命、生殖细胞形成等生理过程相关的差异表达基因以及代谢通路,表明甲吡唑对线虫的其他生命活动也可能会有调控作用,为此,我们进行了进一步的实验验证,结果表明,甲吡唑处理组松材线虫幼虫的发育、线虫的寿命、雌虫的产卵率以及线虫卵的孵化率都出现显着降低。上述实验结果表明,甲吡唑对松材线虫的多种生理功能都具有明显的抑制作用。综上所述,本研究首先通过分析携带荧光假单胞菌松材线虫以及无菌线虫转录组数据,筛选出与醇代谢密切相关的编码醇脱氢酶的上调差异表达基因adh-1,并对松材线虫adh-1的基因结构以及生物信息学信息进行了进一步的分析;其次,通过RNAi技术与醇脱氢酶抑制剂甲吡唑相结合的方法,研究了adh-1基因在松材线虫体内的生理功能,证实了与醇代谢密切相关的adh-1基因确实参与了对松材线虫运动和繁殖的调控,并且进一步研究证实了环境中低浓度乙醇与adh-1基因表达水平之间存在正相关性;最后,我们测定了甲吡唑对松材线虫的毒性,并通过转录组学技术分析了表达水平受甲吡唑显着影响的松材线虫基因,挖掘出一些与松材线虫运动性、繁殖力以及发育相关的差异表达基因以及代谢通路;并通过qRT-PCR技术验证了转录组数据分析结果的可靠性;同时,实验证实了甲吡唑对松材线虫幼虫的发育、寿命、雌虫产卵率以及线虫卵的孵化率都具有显着的干扰效果。本文通过对adh-1的基因功能和甲吡唑的作用机制进行研究,初步确定adh-1基因参与调控松材线虫运动、繁殖等生理活动,对松材线虫的扩散与增殖影响较大,有望成为控制松材线虫的一个靶点;甲吡唑作为adh-1基因编码的醇脱氢酶抑制剂,在μM量级就对松材线虫的一些关键基因表达产生显着影响,从而引起代谢紊乱而呈现明显的杀线活性,使甲吡唑及其衍生物有望成为一种新型的杀线药物。本文研究结果对于深入了解松材线虫发育和致病的分子机理有一定的参考作用,对于松萎蔫病的防控药物的研发也提供了一种新的选择。
王开梅,吴兆圆,柯少勇,万中义,方伟,张亚妮,张志刚[3]（2018）在《微生物来源的核苷类农药活性化合物研究进展》文中研究表明微生物仍然是具有生物活性的天然产物的重要来源,而且微生物次生代谢产物在新农药的研究与开发中占据着重要的地位。核苷作为一类重要的生物活性物质,具有丰富多样的生物活性。本文对微生物来源的具有农药活性的核苷类化合物进行总结,重点概括具有农药活性的微生物源核苷类化合物的来源、结构多样性、农药活性类型及其杀虫、杀菌、除草及抗植物病毒的作用机制,以期对新型农用抗生素的开发及新农药创制提供一些有益的借鉴。
郭群群[4]（2016）在《植物源杀松材线虫活性成分的分离鉴定及杀线机理研究》文中认为松材线虫病,又称松萎蔫病（Pine wilt disease,PWD）,是松树的一种极具毁灭性的病害,松树一经感染,蔓延迅速,涉及数十种松属植物,包括我国在内的世界多个国家存在疫情,该病已发展为世界性的严重森林病害。松材线虫（Bursaphelenchus xylophilus）是松材线虫病主要的病原,松材线虫的防控对于控制松材线虫病至关重要。目前防控松材线虫最直接、有效的杀线虫剂主要是广谱性合成药剂,线虫易产生耐药性,且存在高毒、高残留、污染环境、对非靶标有益生物构成威胁等缺陷,这使得生态友好的天然杀线剂的开发显得尤为迫切。自然界植物资源丰富,植物源杀线剂近些年一直是松材线虫病研究的热点。本实验选择小茴香根、小茴香籽、无花果叶、无花果根、花椒、茼蒿根、独活、苍耳全草、槟榔、鹤虱、艾叶、使君子、石榴皮、百部、蒺藜籽等成本低廉或在开发利用时常被作为副产物的植物原料作为受试材料,采用药物浸渍法对15种原料的乙醇浸提物进行了杀松材线虫活性测试,结果表明无花果叶、无花果根、独活、石榴皮的乙醇提取物具有较强杀松材线虫活性。通过活性追踪,利用柱层析、制备高效液相色谱、重结晶等分离纯化手段从4种植物原料的粗提物中分离得到具有杀松材线虫活性的9种化合物,经质谱、核磁共振波谱等技术鉴定为:补骨脂素1、佛手柑内酯2、蛇床子素3、二氢欧山芹醇当归酸酯4、花椒毒素5、鞣花酸6、安石榴林7、安石榴苷8、柯里拉京9,化合物2-9的杀松材线虫活性均为首次报道。其中补骨脂素1、佛手柑内酯2、蛇床子素3、二氢欧山芹醇当归酸酯4、花椒毒素5和安石榴苷8具有强杀线活性,72 h的LC50值依次为463.32μM,430.08μM,489.17μM,406.74μM,435.66μM,307.08μM。结合强杀松材线虫化合物补骨脂素1、佛手柑内酯2、蛇床子素3、二氢欧山芹醇当归酸酯4、花椒毒素5和安石榴苷8的化学结构和杀线活性进行分析,推测香豆素母核结构苯骈α-吡喃酮为杀线活性的关键;安石榴苷8的强杀松材线虫活性可能是gallagyl基和六羟基联苯二酰基的协同效应所致;6种杀线化合物化学结构中均具有α,β-不饱和羰基,该基团可能对化合物的杀线活性有重要贡献。本实验对分离得到的强杀松材线虫活性化合物补骨脂素1、佛手柑内酯2、蛇床子素3、二氢欧山芹醇当归酸酯4、花椒毒素5和安石榴苷8进行了杀线机理研究。借助体视显微镜、扫描电镜和透射电镜技术,分析了以上6种强杀线活性化合物对松材线虫形态及生理结构的影响:（1）显微镜下观察,补骨脂素1、佛手柑内酯2、蛇床子素3、二氢欧山芹醇当归酸酯4、花椒毒素5对线虫的影响相似,最初活动趋于迟缓但身体严重蜷曲或扭曲,后随时间延长身体逐渐展开,最终趋于僵直,死亡线虫体内多出现异常泡状物或空腔;安石榴苷8处理的线虫,最初较对照身体扭摆加剧,而后活动逐渐迟缓并渐渐趋于僵直,体内多呈现一连串的水泡状结构;（2）扫描电镜结果显示,经6种杀线化合物处理的松材线虫较对照体壁均出现明显的皱缩,线虫虫体经过固定化处理后较对照容易断裂;（3）透射电镜结果表明,杀线化合物处理的线虫较对照出现体内组织与体壁分离现象或异常空腔,细胞不同程度的解体。通过体内、体外试验研究了补骨脂素1、佛手柑内酯2、蛇床子素3、二氢欧山芹醇当归酸酯4、花椒毒素5和安石榴苷8对松材线虫淀粉酶、纤维素酶、乙酰胆碱酯酶、谷胱甘肽S-转移酶等重要催化酶的影响:（1）体外实验表明,6种杀线化合物对线虫淀粉酶、纤维素酶、乙酰胆碱酯酶均有不同程度的抑制作用,安石榴苷8的抑制作用最强,IC50值分别为0.96 m M,1.24 m M,0.60 m M;对于谷胱甘肽S-转移酶,安石榴苷8具有明显的抑制作用,二氢欧山芹醇当归酸酯4具有弱抑制作用,其他4种杀线化合物无明显作用;（2）体内实验表明,受试化合物对于松材线虫体内乙酰胆碱酯酶及谷胱甘肽S-转移酶活性的影响较大。为了更深入了解本研究中最具杀线潜力的安石榴苷8的杀线机理,采用Illumina测序技术对由其处理的松材线虫及对照线虫的转录组进行高通量测序,经过分析,2575条unigenes表达出现显着差异,其中1428条表达上调,1147条表达下调。综合Nr,GO,KOG,KEGG注释结果,推测:松材线虫被安石榴苷8处理后主要通过细胞内噬路径、吞噬体路径、过氧化物酶体路径、MAPK信号通路等途径启动了应急反应;NADH脱氢酶、细胞色素c氧化酶、细胞色素b和电子转移黄素蛋白等呼吸电子传递链相关蛋白,ATP合成酶和β-葡萄糖苷酶等能量代谢相关酶,热休克蛋白,颤搐蛋白以及松材线虫的表皮角质层胶原蛋白等的编码基因是安石榴苷8的重要调控位点,这可能是其杀线的重要原因。采用实时荧光定量PCR（Quantitative real-time PCR,q RT-PCR）技术对通过转录组测序分析筛选出的部分与松材线虫生命活动相关的差异表达基因进行了表达验证,结果与测序数据一致,证实了转录组分析的可靠性。上述研究结果发现为植物源杀松材线虫剂的开发提供了物质基础和理论依据。
陈晓静[5]（2014）在《新型核苷类似物FNC在Beagle犬体内的血浆动力学及大鼠组织分布研究》文中研究指明FNC （2’-脱氧-2’-氟-4’-叠氮-核苷类似物）为郑州大学化学与分子工程学院研发的一种新型核苷类似物。药效学、毒理学研究表明，FNC毒性较低且具有很好的抗病毒、抗肿瘤作用。对胃癌、肝癌、肉瘤具有良好抗肿瘤活性[1,2]，具有很强的抗艾滋病毒（HIV）和乙肝病毒（HBV）活性[3-5]。FNC有望成为新型高效低毒的抗病毒、抗肿瘤核苷类药物。对FNC进行非临床药物代谢动力学研究有利于揭示FNC在动物体内的动态变化规律，可为药物制剂的特性和质量进行评价，对药物的研究开发起着重要作用，为指导临床合理用药提供参考信息。本实验室已经对FNC的药代动力学特征做了一些前期研究，包括FNC在啮齿类动物大鼠体内的血浆动力学、血浆蛋白结合率以及在大鼠体内的排泄研究，其结果表明FNC在大鼠体内生物利用度较高，灌胃给药后在大鼠体内过程符合一室模型，在有效剂量范围具有线性动力学特征，最后主要以原形及代谢物形式通过肾脏排泄[6]；血浆蛋白结合率较低，有利于药物快速分布发挥药效。为了全面评价FNC的药代动力学特征，需要进一步进行FNC在非啮齿类动物体内的药代动力学特征研究，因而本实验进行FNC在Beagle犬体内的血浆动力学以及在大鼠体内的组织分布研究。本研究主要分两部分，具体内容如下:第一部分FNC在Beagle犬体内的血浆动力学研究第一节Beagle犬血浆样品中FNC HPLC-MS/MS定量分析方法的建立与验证采用甲醇蛋白沉淀法对血浆样品进行前处理，用HPLC-MS/MS方法对血浆样品中的FNC进行分离与检测，优化分析方法的色谱与质谱条件，建立犬血浆中FNC的测定方法并对本分析方法进行验证。结果显示：经过本实验建立的方法处理的样品FNC在0.5-400ng·mL-1线性关系良好（R2>0.99），定量限为0.5ng·mL-1，提取回收率在82.7%以上，日内、日间的RSD均小于7.49%。本方法灵敏度和准确度高，分析速度快，方法学验证结果符合体内药物分析要求，且稳定，能满足分析大量样品的需要。第二节FNC在Beagle犬体内的血浆动力学研究Beagle犬单次经口灌胃给药FNC0.05、0.1、0.2mg·kg-1后，于不同时间点采血，血浆处理后用上述建立的HPLC-MS/MS法测定FNC的血药浓度，用DAS3.0软件采用非房室模型计算它的药代动力学参数。血浆中药物的消除半衰期t1/2z分别为（3.91±0.64） h、（3.61±1.04） h和（4.92±0.83） h；峰浓度Cmax分别为（45.77±5.08）、（80.47±8.88）和（200.57±34.11） ng·mL-1；AUC0-t分别为（227.53±23.98）、（375.85±74.84）和（1061.27±233.91） ng·h·mL-1， Cmax和AUC0-t均随剂量增加而增加（P<0.05），高、中、低剂量半衰期基本不变（p>0.05），在0.05-0.2mg·kg-1范围内符合线性动力学特点，雌雄犬口服FNC的药代动力学不存在性别差异。第二部分FNC在大鼠体内的组织分布研究建立并验证FNC在大鼠组织中的HPLC-MS/MS分析方法，测定大鼠经口灌胃给药FNC制剂0.52mg·kg-1后组织中的FNC浓度，研究FNC在大鼠体内的组织分布情况。结果表明本实验建立的分析方法灵敏度和准确度高，方法学验证结果均符合体内药物分析要求，适合组织样品中FNC的分析检测。给药后FNC分布最多的组织是免疫器官胸腺和脾脏且消除较慢，胸腺中FNC含量在给药后12h达到最大，脾脏中FNC的浓度在给药后7h达到最大。在心、肝等组织分布较少且消除较快，在脂肪、脑和脊髓组织中含量最少。
王景玉[6]（2013）在《大叶藻抑制松材线虫及其携带细菌活性成分的分离与鉴定》文中进行了进一步梳理松萎蔫病（PWD）是由松材线虫及其携带的细菌引起的一种松树毁灭性病害。本文研究了大叶藻中提取物的杀线活性及其对线虫携带细菌的抑制作用,分离鉴定了其中一种活性成分-—迷迭香酸。通过萃取、AB-8大孔吸附树脂柱层析、重结晶等方法从大叶藻中分离到了一种淡黄色晶体,1H NMR和HPLC（?）确定了晶体的结构,单因素实验和L9（34）正交实验优化了其提取工艺,镜检法及抑菌圈法测定了其对松材线虫及其携带细菌的抑制作用。结果表明,从大叶藻中所得晶体为迷迭香酸；迷迭香酸的最佳提取条件为：70%乙醇,40℃,提取3h,料液比1：50（W/V）,提取率为3.13mg/g；该化合物对松材线虫的24h,48h,72h半数致死浓度分别为1.18mg/mL,1.05mg/mL和0.95mg/mL;10.0mg/mL,的大叶藻粗提物和1.0mg/mL的迷迭香酸对4种松材线虫携带的细菌：克雷伯丝菌属（Klebsiella sp.）、嗜麦芽窄食单胞菌（Stenotrophomonas maltophilia）、链霉菌属（Streptomyces sp.）和成团泛菌（Pantoea agglomerans）均有不同程度的抑制作用,其中粗提物的乙酸乙酯萃取组分的抑菌作用最强,正丁醇萃取组分的活性最弱；四种实验菌株中,克雷伯丝菌属对各萃取组分最为敏感。大叶藻中迷迭香酸的含量随季节变化,7月含量最高,2月含量最低。本研究为从大叶藻中寻找治疗松萎蔫病的杀虫剂提供了依据。
黄响珠[7]（2013）在《海洋放线菌小单孢菌（Micromonospora）对松材线虫（Bursaphelenchus xylophilus）的作用》文中提出稀有海洋放线菌是从闽江深海中分离得到的,主要用于医用抗生素研究的放线菌。为了将该菌株开发利用于农林业等其他非医药领域,本研究筛选对松材线虫具有击倒活性的高效菌株,并对目标菌株的培养基配方和培养条件进行优化,以提高其杀线虫活性,同时对活性较强的菌株11进行了形态学和分子生物学初步鉴定。1、在室内采用链格孢菌（Alternaria）培养繁殖线虫的基础上,尝试筛选其他可供线虫取食真菌,结果率先发现荔枝霜疫霉（Peronophythora litchii）和疣孢霉菌（Mycogone perniciosa magn）可作为线虫食料,28℃ PDA培养基上培养10d繁殖倍数分别为64.50和63.20。2、以松材线虫为靶标生物,以放线菌菌株发酵粗提液为初筛溶液,采用96孔板生测法筛选196个粗提放线菌样品,测定其在不同浓度不同处理时间下松材线虫死亡率情况,结果发现总体杀线虫活性比较高,5%低浓度分别处理12 h和24 h死亡率大于80%的样品数分别达总样品数的50%和77.94%,最后确定6株高效菌株进行复筛。分别用有机培养基和无机培养基对菌株进行模拟实际应用发酵并测定活性,最后选取菌体生长速度快、活性较为稳定的菌株11作为目标菌株进行下一步优化鉴定。3、经过形态鉴定、培养基特征、生理生化特征和16S rDNA序列分析,将菌株11初步鉴定为小单孢菌（Micromonospora）,16SrDNA测序分析结果与青铜小单孢菌（M.chalcea）（1464-217 L）序列相似性达 99%。4、通过单因子实验、均匀设计实验和响应面优化得到放线菌菌株11最佳培养基配方和最佳培养条件:（1）单因子法得到最适碳源、氮源、培养时间、接种量、装液量、初始 pH 分别为可溶性淀粉、酵母粉、96h、12%、60mL/250mL、7.2-7.5。（2）Plackett-Burman设计筛选得到主效因子分别是:碳酸钙浓度（0.29g/L）,装液量（55mL）,氮源浓度（7g/L）。（3）通过一次正交回归设计、响应面优化设计得到最佳活性下培养基成分和培养条件为:可溶性淀粉（20g/L）、酵母粉（25g/L）、氯化钠（0.5g/L）、磷酸氢二钾（0.5g/L）、硫酸镁（0.5g/L）、碳酸钙（0.38g/L）、温度（28 ℃）、初始pH（7.2）、培养时间（96 h）、接种量（10%）、装液量（72 mL/250 mL）,发酵上清液杀线虫死亡率为:99.2%,沉淀杀线虫死亡率为97.54%,菌体的生物量为2.16 g,接近预测值。同时,辅以均匀设计:优化条件x1（可溶性淀粉浓度）=10g/L,x2（酵母粉）=1 g/L,x3（磷酸氢二钾）=0.1g/L,x4（氯化钠）=0.1g/L,x5（硫酸镁）=0.1g/L 时,y1（上清液致死率）=98.06%,y2（胞内物质致死率）= 86.35%,y3（生物量）=0.9236 g。比较两种优化方法,响应面优化法原料成本较高,但效果较后者优,总的来说,两种方法优化结果均理想,均表明菌株具有稳定的产生杀线虫活性物质的能力,具有开发价值。
刘娟[8]（2012）在《具有杀松材线虫活性的苏云金芽孢杆菌cry基因的克隆》文中提出化学农药在防治农业有害生物方面的应用效果显着，但是由于化学农药的过量使用，环境问题也随之产生。生物农药以其独显的高效低毒的特点，将在农业病虫害防治中得到越来越广泛的应用。苏云金芽孢杆菌制剂是目前研究最为深入，应用最为广泛的生物农药。其产物的结晶伴胞晶体蛋白对磷翅目、半翅目昆虫具有特异的毒杀效果。挖掘我国丰富的Bt资源，筛选出更多具有杀虫活性的Bt菌,分离克隆其编码杀虫蛋白的基因，对构建Bt工程菌，培育转Bt的抗虫植物具有深远的意义。松材线虫是一种林业有害生物，对松树具有毁灭性的危害，它通过松墨天牛进行传播，松树一旦感染上松材线虫，将在很短的时间内死亡。目前，对松材线虫的防治主要是针对其媒介昆虫松墨天牛来进行的，主要以化学防治为主，直接针对松材线虫进行防治难度较大，国内外研究的较少。本实验室从环境中分离出80株苏云金芽孢杆菌，初步筛选出8株对松材线虫具有毒杀作用的菌株，进一步提取这8株菌株的伴孢晶体蛋白，对松材线虫进行毒力测定，最后筛选出一株对松材线虫具有最强毒杀活性的菌株，命名为ZJFC85菌株。已经知道对松材线虫具有毒杀活性的是ZJFC85菌株编码产生的伴孢晶体蛋白，为了能为培育出抗松材线虫病的松树树种提供遗产材料，本实验室将克隆出ZJFC85菌株中能编码产生的伴孢晶体蛋白cry基因。通过查阅文献，设计9对cry基因保守区域的引物，以ZJFC85菌株质粒DNA为模板进行PCR扩展，扩增出一段保守区域序列cry1，对cry1基因进行克隆，克隆产物送出测序，测序结果分析该菌株含有cry1Aa基因，设计cry1Aa基因的特异性引物，PCR扩增得到cry1Aa基因的全长基因，对cry1基因的全长基因进行克隆，得到我们需要的遗产材料。
郭延志[9]（2012）在《小茴香粗提液对松材线虫的杀灭作用及其对松材线虫携带细菌抑制作用的研究》文中提出本文主要研究了小茴香粗提液对松材线虫的杀灭作用及对松材线虫携带细菌的抑制作用。小茴香乙醇提取物蒸干后蒸馏水溶解,经乙酸乙酯萃取后,得到的水相和乙酸乙酯相分别处理松材线虫,结果发现小茴香的杀线活性成分存在于水相中。通过比较小茴香乙醇提取物和蛋白质对松材线虫的杀灭作用,结果表明小茴香蛋白质没有杀线活性。利用水和不同比例的乙醇溶液分别浸取小茴香研磨物,发现纯水和纯乙醇的浸取液有很强的杀线活性。本实验得出小茴香乙醇粗提液在24h、36h、48h、60h、72h的半数致死剂量（LC50）分别为16.496mg/mL,9.508mg/mL,8.802mg/mL, 7.845mg/mL, and 7.557mg/mLo同时本文还对小茴香提取物对松材线虫携带细菌的抑菌性进行了研究。研究发现小茴香粗提液在浓度为37.333mg/mL条件下,对松材线虫携带的细菌有较好的抑制作用,其抑菌效果为77.3%；且在该浓度条件下能够对松材线虫携带的荧光假单胞菌GcM5-1A达到完全抑制的效果。根据菌落形态的特点筛选出三株对小茴香粗提液敏感菌株和一株不敏感菌株,根据16srDNA序列结合常规生理生化检验对分离菌种进行了鉴定。结果表明,三株敏感菌分别属于克雷伯氏菌属（Klebsiella sp.）、嗜麦芽寡养单胞菌（Stenotrophomonas maltophilia）、链霉菌属（Streptomyces sp.）,株非敏感菌属于成团泛菌（Pantoea agglomerans）。该研究将为环境友好型松萎蔫病防治药物的研究提供参考。
茹祥[10]（2012）在《抗香蕉枯萎病土壤放线菌的分离及田间防治效果试验》文中提出香蕉枯萎病是由尖孢镰刀菌古巴专化型（Fusarium oxysporum f.sp.cubense, Foc）侵染而引起的毁灭性土传病害。迄今为止,尚没有十分有效的化学防治措施用于香蕉枯萎病的防治。在化学防治不能奏效的情况下,国内外的相关研究人员开始了生物防治方法的初步探索。海南省吊罗山原始林区是我国热带原始雨林分布区之一,这里蕴藏着大量的微生物资源,为了分离获得对香蕉枯萎病具有较好防治效果的生防微生物菌株,我们对海南吊罗山原始林区进行了系统的土壤采集和拮抗放线菌的分离,并进行了田间防治效果评价,主要研究结果如下：1.在海南省吊罗山原始林区不同海拔区域,采集土壤样品61份,采用传统分离培养基和本实验设计的BN培养基相结合进行筛选得到385株放线菌。结果自行设计的BN培养基显现出更强的分离效果,获得放线菌菌株数量和种类都优于传统分离培养基。2.将分离得到的385株放线菌进行平板拮抗活性测试,初筛得到16株对香蕉枯萎病菌具有拮抗活性的放线菌,其中DL-28和DL-24菌株具强抑菌活性,抑菌直径分别为17.2mm和16.8mm。3.将平板对峙培养得到的5株具有中等活性以上的放线菌进行摇瓶发酵,发现菌株DL-28和DL-24的发酵液对香蕉枯萎病菌4号生理小种具有强抑菌活性,抑菌圈的直径分别为16.9mm和16.1mm。4.对DL-28和DL-24的发酵液进行了抑菌活性稳定性研究,发现DL-28和DL-24的发酵液经5～75℃水浴处理后,两者抑菌活性差异不显着；在PH4-9条件下,两者抑菌活性差异不显着；经自然光照射48h后,两者抑菌活性差异不显着。5.通过伤根和叶片双重接种法测定了五株中等活性放线菌对香蕉枯萎病的盆栽防治效果,结果表明,接种100天后,菌株DL-28和DL-24对香蕉枯萎病的平均防治效果分别达83.65%和76.51%。6.田间防治试验结果表明,香蕉定植7个月后,菌株DL-28和DL-24对香蕉枯萎病的平均防效达47.50%和67.50%。且植株发病症状相对较轻。7.对菌株DL-28和DL-24进行了多相分类鉴定,根据16S rDNA测序分析和系统发育树的分析,结合形态培养、生理生化等特征进行菌株初步鉴定,结果表明：菌株DL-28为S. racemochromogenes,菌株DL-24为S.misakiensis。
二、核苷N9705的抗病毒、抗菌杀虫活性研究（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、核苷N9705的抗病毒、抗菌杀虫活性研究（论文提纲范文）
（1）具有农药活性的微生物源核苷类化合物（论文提纲范文）
| Contents |
| 1 引言 |
| 2 具有农药活性的核苷碱基及其衍生物 |
| 3 具有农药活性的含嘌呤或嘧啶的核苷及其衍生物 |
| 3.1 具有农药活性的腺苷及腺苷衍生物 |
| 3.2 具有农药活性的鸟苷及鸟苷衍生物 |
| 3.3 具有农药活性的胞嘧啶核苷及其衍生物 |
| 3.4 具有农药活性的尿嘧啶核苷类化合物 |
| 3.5 具有农药活性的胸腺嘧啶核苷类化合物 |
| 4 具有农药活性的核苷酸类似物 |
| 5 其他类型的农药活性核苷类化合物 |
| 5.1 吡咯并嘧啶类核苷 |
| 5.2 吡唑并嘧啶类核苷 |
| 5.3 其他具有农药活性的核苷类化合物 |
| 6 结论 |
（2）松材线虫醇脱氢酶基因的生理功能研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| abstract |
| 引言 |
| 第一章 松材线虫醇脱氢酶基因adh-1的获取与生物信息学分析 |
| 材料与方法 |
| 1.1 主要实验方法 |
| 1.1.1 携带荧光假单胞菌松材线虫差异表达基因的分析 |
| 1.1.2 松材线虫醇脱氢酶基因的获取及结构分析 |
| 1.1.3 松材线虫醇脱氢酶adh-1 的生物信息学分析 |
| 实验结果 |
| 1.1 携带荧光假单胞菌松材线虫差异表达基因的分析 |
| 1.2 松材线虫醇脱氢酶adh-1 基因的结构分析 |
| 1.3 松材线虫醇脱氢酶氨基酸序列相似性分析 |
| 1.4 松材线虫醇脱氢酶adh-1 基因的生物信息学分析 |
| 本章小结 |
| 第二章 松材线虫adh-1 基因的功能分析 |
| 材料与方法 |
| 2.1 实验材料 |
| 2.2 主要实验方法 |
| 2.2.1 松材线虫的培养 |
| 2.2.2 松材线虫adh-1 基因RNAi干扰片段的获取及dsRNA的体外转录 |
| 2.2.3 浸泡法干扰松材线虫adh-1 基因的表达 |
| 2.2.4 干扰组松材线虫adh-1 基因表达水平的检测 |
| 2.2.5 干扰组松材线虫体内醇脱氢酶活力分析 |
| 2.2.6 adh-1 基因干扰后对松材线虫运动能力的影响 |
| 2.2.7 adh-1 基因干扰后对松材线虫繁殖能力的影响 |
| 2.2.8 adh-1 基因干扰后对松材线虫乙醇耐受性的影响 |
| 2.2.9 adh-1 基因干扰后对松材线虫取食能力的影响 |
| 2.2.10 甲吡唑对松材线虫醇脱氢酶活力的影响 |
| 2.2.11 甲吡唑对松材线虫运动能力的影响 |
| 2.2.12 甲吡唑对松材线虫繁殖能力的影响 |
| 2.2.13 甲吡唑对松材线虫取食能力的影响 |
| 2.2.14 低浓度乙醇对松材线虫adh-1 基因表达水平的影响 |
| 实验结果 |
| 2.1 adh-1 基因RNAi干扰片段的选择 |
| 2.2 体外转录dsRNA模板的胶回收 |
| 2.3 体外转录及dsRNA的合成与纯化 |
| 2.4 干扰组松材线虫adh-1 基因表达水平的检测 |
| 2.5 干扰组松材线虫体内脱氢酶的活力分析 |
| 2.6 adh-1 基因干扰后对松材线虫运动能力的影响 |
| 2.7 adh-1 基因干扰后对松材线虫繁殖能力的影响 |
| 2.8 adh-1 基因干扰后对松材线虫乙醇耐受性的影响 |
| 2.9 adh-1 基因干扰后对松材线虫取食能力的影响 |
| 2.10 甲吡唑对松材线虫醇脱氢酶活力的影响 |
| 2.11 甲吡唑对松材线虫运动能力的影响 |
| 2.12 甲吡唑对松材线虫繁殖能力的影响 |
| 2.13 甲吡唑对松材线虫取食能力的影响 |
| 2.14 低浓度乙醇对松材线虫adh-1 基因表达水平的影响 |
| 本章小结 |
| 第三章 甲吡唑对松材线虫毒力测定以及甲吡唑处理组松材线虫转录组分析 |
| 材料与方法 |
| 3.1 实验材料 |
| 3.2 主要实验方法 |
| 3.2.1 甲吡唑对松材线虫的毒性测定 |
| 3.2.2 甲吡唑处理组松材线虫的转录组分析 |
| 3.2.3 甲吡唑对松材线虫幼虫发育的影响 |
| 3.2.4 甲吡唑对松材线虫寿命的影响 |
| 3.2.5 甲吡唑对松材线虫产卵率的影响 |
| 3.2.6 甲吡唑对松材线虫卵孵化率的影响 |
| 3.2.7 实验数据处理 |
| 实验结果 |
| 3.1 甲吡唑对松材线虫的毒性测定 |
| 3.2 上机前不同处理组线虫总RNA的质量检测 |
| 3.3 转录组序列分析结果 |
| 3.4 转录组数据的qRT-PCR验证 |
| 3.5 甲吡唑对松材线虫幼虫发育的影响 |
| 3.6 甲吡唑对松材线虫寿命的影响 |
| 3.7 甲吡唑对松材线虫产卵率的影响 |
| 3.8 甲吡唑对松材线虫卵孵化率的影响 |
| 本章小结 |
| 全文讨论与结论 |
| 参考文献 |
| 综述 |
| 参考文献 |
| 攻读学位期间的研究成果 |
| 附录图 |
| 缩写词及英汉对照 |
| 致谢 |
（4）植物源杀松材线虫活性成分的分离鉴定及杀线机理研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 引言 |
| 材料和方法 |
| 1.实验材料 |
| 1.1 实验供试材料 |
| 1.2 主要试剂 |
| 1.3 主要仪器 |
| 2.实验方法 |
| 2.1 松材线虫的培养 |
| 2.2 杀松材线虫活性植物的筛选 |
| 2.3 植物源杀松材线虫活性成分的分离及化学结构鉴定 |
| 2.4 植物源杀松材线虫活性组分的活性研究 |
| 2.5 杀线活性物质对松材线虫的杀线机理研究 |
| 2.6 数据处理 |
| 实验结果 |
| 1.植物源杀松材线虫活性物质的分离鉴定及杀线活性研究 |
| 1.1 各种植物原料及植物成分的杀松材线虫活性 |
| 1.2 植物源杀线活性成分的化学结构鉴定 |
| 1.3 植物源杀线活性成分对松材线虫的活性影响 |
| 2.植物源杀松材线虫活性物质的杀线机理研究 |
| 2.1 杀线物质处理的松材线虫显微镜下行为、形态的观察结果 |
| 2.2 杀线物质处理的松材线虫生理结构的电镜观察结果 |
| 2.3 杀线活性物质对松材线虫催化酶的影响结果 |
| 2.4 安石榴苷处理的松材线虫与对照线虫的转录组测序结果 |
| 结果讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 文献综述 |
| 参考文献 |
| 攻读学位期间的研究成果 |
| 附录 |
| 致谢 |
（5）新型核苷类似物FNC在Beagle犬体内的血浆动力学及大鼠组织分布研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 缩写词对照表 |
| 引言 |
| 第一部分 FNC 在 Beagle 犬体内的血浆动力学 |
| 第一节 Beagle 犬血浆样品中 FNC 定量分析方法的建立与验证 |
| 1 实验材料和仪器 |
| 1.1 主要仪器与设备 |
| 1.2 实验药品与试剂 |
| 1.3 生物样品来源 |
| 2 实验方法 |
| 2.1 样品前处理 |
| 2.2 分析条件 |
| 2.3 方法学考察 |
| 2.4 未知样品的测定 |
| 3 实验结果 |
| 3.1 标准曲线的线性和范围及定量限（LLOQ）的确定 |
| 3.2 分析方法基质效应 |
| 3.3 分析方法专属性 |
| 3.4 分析方法准确度与精密度 |
| 3.5 分析方法提取回收率 |
| 3.6 稳定性考察 |
| 3.7 未知样品的测定 |
| 4 讨论 |
| 4.1 质谱检测条件的优化 |
| 4.2 色谱分离条件的选择 |
| 4.3 生物样品处理方法的优化 |
| 4.4 内标化合物的选择 |
| 5 小结 |
| 第二节 FNC 在 Beagle 犬体内血浆药代动力学研究 |
| 1 实验材料 |
| 1.1 受试动物 |
| 1.2 药品与试剂 |
| 2 实验方法 |
| 2.1 分析条件 |
| 2.2 实验设计与样品采集 |
| 2.3 犬血浆样品测定 |
| 2.4 数据分析 |
| 3 实验结果 |
| 3.1 犬单次经口灌胃给药血浆药代动力学 |
| 4 讨论 |
| 5 小结 |
| 第二部分 FNC 的大鼠组织分布研究 |
| 1 实验材料和仪器 |
| 1.1 主要仪器与设备 |
| 1.2 实验药品与试剂 |
| 1.3 受试动物 |
| 2 实验方法 |
| 2.1 组织中 FNC 分析方法的建立与验证 |
| 2.1.1 组织器官匀浆液的制备与样品前处理 |
| 2.1.2 分析条件 |
| 2.1.3 主要试液的配制 |
| 2.1.4 方法学考察 |
| 2.1.5 未知样品的测定 |
| 2.2 FNC 在大鼠的组织分布 |
| 2.2.1 动物实验设计与组织样品的采集 |
| 2.2.2 大鼠组织样品的测定 |
| 3 实验结果 |
| 3.1 方法学验证结果 |
| 3.1.1 专属性考察 |
| 3.1.2 基质效应考察 |
| 3.1.3 生物样品中 FNC 标准曲线的制备及定量限（LLOQ） |
| 3.1.4 精密度和准确度考察 |
| 3.1.5 提取回收率考察 |
| 3.1.6 稳定性考察 |
| 3.2 未知样品测定 |
| 3.3 SD 大鼠经口灌胃 FNC 的组织分布 |
| 4 讨论 |
| 5 小结 |
| 全文总结 |
| 参考文献 |
| 综述 |
| 参考文献 |
| 个人简历 |
| 致谢 |
（6）大叶藻抑制松材线虫及其携带细菌活性成分的分离与鉴定（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 引言 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 材料 |
| 1.1.1 大叶藻,松材线虫及其携带细菌 |
| 1.1.2 主要仪器 |
| 1.1.3 主要试剂 |
| 1.2 方法 |
| 1.2.1 大叶藻提取物的准备 |
| 1.2.2 大叶藻粗提物的杀线活性 |
| 1.2.3 杀线活性物质的分离纯化 |
| 1.2.4 杀线活性物质的结构鉴定 |
| 1.2.5 迷迭香酸的杀线活性 |
| 1.2.6 迷迭香酸提取的单因素实验 |
| 1.2.7 迷迭香酸提取条件的正交优化 |
| 1.2.8 大叶藻中迷迭香酸含量的季节性变化 |
| 1.2.9 迷迭香酸及大叶藻粗提物对松材线虫携带的四种细菌的抑制作用 |
| 2 结果分析 |
| 2.1 大叶藻粗提物的杀线活性 |
| 2.2 迷迭香酸的结构鉴定 |
| 2.3 迷迭香酸的杀线活性 |
| 2.4 从大叶藻中提取迷迭香酸的条件优化 |
| 2.4.1 单因素实验 |
| 2.4.2 正交实验 |
| 2.5 大叶藻中迷迭香酸的季节性变化 |
| 2.6 大叶藻粗提物及迷迭香酸对4种实验菌株的抑制作用 |
| 3 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 文献综述 |
| 综述参考文献 |
| 攻读学位期间的研究成果 |
| 附录 |
| 致谢 |
（7）海洋放线菌小单孢菌（Micromonospora）对松材线虫（Bursaphelenchus xylophilus）的作用（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 第一章 文献综述 |
| 1 松材线虫人工培养 |
| 1.1 生长繁殖的营养来源 |
| 1.2 化学生物学 |
| 1.3 人工培养 |
| 1.3.1 单异活体培养法 |
| 1.3.2 人工合成培养基直接培养松材线虫 |
| 2 松材线虫生物防治 |
| 2.1 病原微生物的应用 |
| 2.1.1 真菌 |
| 2.1.2 细菌 |
| 2.1.3 其他 |
| 2.2 生防植物的应用 |
| 2.3 螨和合成衍生物 |
| 2.4 松墨天牛的生物防治 |
| 3 放线菌在线虫防治方面的应用 |
| 3.1 常见的具杀线虫活性的两种放线菌毒素 |
| 3.2 放线菌杀线虫活性 |
| 3.3 小单孢菌在农业上的应用 |
| 4 培养基优化设计方法 |
| 4.1 优化因子选择 |
| 4.2 优化设计与统计分析 |
| 4.2.1 单因子设计 |
| 4.2.2 析因设计 |
| 4.2.3 响应面设计 |
| (a) 中心组合设计 |
| (b) BB设计 |
| 4.2.4 人工神经网络和遗传算法 |
| 5 研究目的、主要内容、技术路线 |
| 第二章 用于松材线虫取食繁殖的真菌筛选 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 实验材料 |
| 1.1.1 虫源和菌株 |
| 1.1.2 培养基 |
| 1.1.3 试剂 |
| 1.1.4 主要仪器和设备 |
| 1.2 实验方法 |
| 1.2.1 线虫扩大培养 |
| 1.2.2 食料真菌的筛选及其条件优化 |
| 2 结果与分析 |
| 2.1 供筛选真菌培养线虫情况 |
| 2.2 影响线虫培养的几个因素 |
| 2.2.1 表面消毒对松材线虫生长的影响 |
| 2.2.2 温度对线虫繁殖的影响 |
| 2.2.3 接种量对线虫繁殖影响 |
| 2.2.4 培养基对线虫繁殖的影响 |
| 2.3 培养验证 |
| 3 讨论 |
| 3.1 不同真菌对松材线虫生长的影响 |
| 3.2 不同接种量对松材线虫繁殖的影响 |
| 第三章 小单孢菌杀线菌株筛选和发酵液制备 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 材料 |
| 1.1.1 培养基 |
| 1.1.2 试剂和药剂 |
| 1.1.3 主要仪器和设备 |
| 1.2 方法 |
| 1.2.1 产生杀线虫活性物质海洋放线菌的筛选 |
| 1.2.2 发酵培养 |
| 1.2.3 放线菌发酵液的制备 |
| 1.2.4 杀线虫活性测定方法 |
| 2 结果与分析 |
| 2.1 活性菌株筛选 |
| 2.1.1 初筛 |
| 2.1.2 复筛 |
| 2.2 发酵液制备 |
| 2.2.1 有机C/N源培养基发酵 |
| 2.2.2 无机基础培养基发酵 |
| 3 讨论 |
| 第四章 放线菌11的系统发育学研究 |
| 1 材料和方法 |
| 1.1 材料 |
| 1.1.1 菌株 |
| 1.1.2 培养基 |
| 1.2 方法 |
| 1.2.1 形态观察 |
| 1.2.2 培养性状观察 |
| 1.2.3 生理生化实验 |
| 1.2.4 16S rDNA系列分析 |
| 2 结果与分析 |
| 2.1 形态特征观察 |
| 2.2 生理生化特征 |
| 2.3 16S rDNA测序分析 |
| 2.4 系统发育树的建立 |
| 3 讨论 |
| 第五章 活性菌株发酵和培养条件优化 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 供试菌株 |
| 1.2 培养基 |
| 1.3 培养条件 |
| 1.4 培养基成份对菌株活性的影响 |
| 1.4.1 不同碳源 |
| 1.4.2 不同氮源 |
| 1.4.3 均匀设计实验 |
| 1.5 培养条件对菌株活性的影响 |
| 1.5.1 初始pH |
| 1.5.2 装液量 |
| 1.5.3 接种量 |
| 1.5.4 发酵时间 |
| 1.6 响应面法优化生物活性物质 |
| 1.6.1 Plackett-Burman设计法筛选显着因子 |
| 1.6.2 响应面最优法 |
| 1.6.3 优化结果验证 |
| 2 结果与分析 |
| 2.1 培养基成份对菌株活性的影响 |
| 2.1.1 单一碳源氮源 |
| 2.1.2 均匀设计 |
| 2.2 培养条件对菌株活性的影响 |
| 2.2.1 初始pH对杀线活性的影响 |
| 2.2.2 装液量pH对杀线活性的影响 |
| 2.2.3 接种量pH对杀线活性的影响 |
| 2.2.4 发酵液培养时间对杀线虫活性的影响 |
| 2.3 响应面法优化生物活性物质 |
| 2.3.1 Plackett-Burman设计法筛选显着因子 |
| 2.3.2 一次回归正设计法确定因子的优化方向 |
| 2.3.3 最速登高法确定因子中心值 |
| 2.3.4 响应面最优法 |
| 2.3.5 优化结果验证 |
| 3 讨论 |
| 第六章 总结与展望 |
| 参考文献 |
| 附录1 |
| 致谢 |
（8）具有杀松材线虫活性的苏云金芽孢杆菌cry基因的克隆（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 1 文献综述 |
| 1.1 松材线虫病危害及其防治研究 |
| 1.1.1 松材线虫病危害 |
| 1.1.2 松材线虫病防治研究 |
| 1.2 苏云金芽孢杆菌研究进展 |
| 1.2.1 苏云金芽孢杆菌简介 |
| 1.2.2 苏云金芽孢杆菌的生物学特性 |
| 1.2.3 苏云金芽孢杆菌杀虫晶体蛋白基因的分类及杀虫谱 |
| 1.2.4 苏云金芽孢杆菌杀虫晶体蛋白基因的生物活性 |
| 1.2.5 苏云金芽孢杆菌杀虫晶体蛋白基因的克隆 |
| 1.2.6 苏云金芽孢杆菌在杀线虫防治上的研究 |
| 1.3 本研究的目的和意义 |
| 2 材料和方法 |
| 2.1 实验材料 |
| 2.1.1 供试菌株和质粒 |
| 2.1.2 培养基与试剂 |
| 2.1.3 实验仪器 |
| 2.2 实验方法 |
| 2.2.1 Bt 菌株的培养和保存 |
| 2.2.2 Bt 菌总 DNA 的提取 |
| 2.2.3 Bt 质粒 DNA 的提取 |
| 2.2.4 琼脂糖凝胶电泳 |
| 2.2.5 Bt cry 基因的克隆 |
| 3 结果与分析 |
| 3.1 苏云金芽孢杆菌质粒 DNA 提取电泳图谱 |
| 3.2 Bt 菌株 zjfc85 中的 cry 基因的克隆及序列测定 |
| 3.2.1 Bt 菌株 zjfc85 中的 cry 基因的克隆 |
| 3.2.2 Bt 菌株 zjfc85 中的 cry 基因部分序列测定及分析 |
| 3.3 Bt 菌株 zjfc85 中的 cry1Aa 全长基因的克隆 |
| 3.3.1 Bt 菌株 zjfc85 中的 cry1Aa 全长基因的克隆 |
| 3.3.2 Bt 菌株 zjfc85 中的 cry1Aa 全长基因的测序及分析 |
| 4 讨论 |
| 4.1 苏云金芽孢杆菌质粒 DNA 的提取 |
| 4.2 苏云金芽孢杆菌 cry1Aa 全长基因的扩展 |
| 4.3 苏云金芽孢杆菌 cry1Aa 全长基因的克隆 |
| 4.4 利用苏云金芽孢杆菌防治松材线虫病的探索 |
| 4.5 进一步展望和接下来的工作 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 作者简介 |
| 致谢 |
（9）小茴香粗提液对松材线虫的杀灭作用及其对松材线虫携带细菌抑制作用的研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 引言 |
| 第一章 小茴香粗提液对松材线虫的杀灭作用及其对松材线虫携带细菌抑制作用的研究 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 实验材料 |
| 1.2 主要仪器设备 |
| 1.3 实验方法 |
| 1.3.1 松材线虫的培养 |
| 1.3.2 小茴香乙醇提取液分相后对松材线虫杀灭作用的比较 |
| 1.3.3 小茴香乙醇提取液和蛋白质提取液对松材线虫杀灭作用的比较 |
| 1.3.4 小茴香乙醇提取工艺的探索 |
| 1.3.5 小茴香粗提液对松材线虫杀灭作用的LC_(50)值测定 |
| 1.3.6 数据处理 |
| 1.3.7 小茴香粗提液对松材线虫携带细菌的抑制作用 |
| 1.3.8 小茴香粗提液对荧光假单胞菌GcM5-1A的抑制作用 |
| 2 结果与分析 |
| 2.1 小茴香粗提液对松材线虫杀灭作用的研究 |
| 2.1.1 小茴香乙醇提取液分相后对松材线虫杀灭作用的比较 |
| 2.1.2 小茴香乙醇提取液和蛋白质提取液对松材线虫杀灭作用的比较 |
| 2.1.3 小茴香乙醇提取工艺的探索 |
| 2.1.4 小茴香粗提液对松材线虫杀灭作用的LC_(50)值测定 |
| 2.2 小茴香粗提液对松材线虫携带细菌的抑制作用 |
| 2.2.1 小茴香粗提液对分离自松材线虫的细菌的抑制 |
| 2.2.2 小茴香粗提液对荧光假单胞菌GcM5-1A的抑制作用 |
| 3 讨论 |
| 第二章 对小茴香粗提液三株敏感菌和一株非敏感菌的菌种鉴定 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 主要材料及试剂配方 |
| 1.2 主要仪器设备 |
| 1.3 实验方法 |
| 1.3.1 菌种分离纯化 |
| 1.3.2 菌落形态观察 |
| 1.3.3 常规染色实验 |
| 1.3.4 生理生化测试 |
| 1.3.5 分子生物学测定 |
| 2 结果与分析 |
| 2.1 菌落形态 |
| 2.2 常规染色实验 |
| 2.3 生理生化测试 |
| 2.4 分子生物学测定 |
| 3 讨论 |
| 参考文献 |
| 综述 |
| 综述参考文献 |
| 攻读学位期间的研究成果 |
| 致谢 |
（10）抗香蕉枯萎病土壤放线菌的分离及田间防治效果试验（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 目录 |
| 1 前言 |
| 1.1 利用放线菌防治植物病害的研究 |
| 1.1.1 国内外利用放线菌防治植物病害的历史和现状 |
| 1.1.2 放线菌在植物病害防治中的主要作用机制 |
| 1.1.3 国内外利用放线菌防治香蕉枯萎病的历史和现状 |
| 1.1.4 生防放线菌的主要来源 |
| 2 香蕉枯萎病的发病机制及主要防治技术 |
| 2.1 香蕉枯萎病发生的历史和现状 |
| 2.2 香蕉枯萎病病原菌的生物学特性 |
| 2.3 香蕉枯萎病的侵染特点和症状 |
| 2.4 香蕉枯萎病的致病机理 |
| 2.5 香蕉枯萎病的防治方法 |
| 2.5.1 规范香蕉种苗的植物检疫制度 |
| 2.5.2 抗病品种的选育 |
| 2.5.3 香蕉枯萎病的化学防治 |
| 2.5.4 香蕉枯萎病的生物防治 |
| 2.6 本研究的目的和意义 |
| 3 实验材料和方法 |
| 3.1 实验材料 |
| 3.1.1 主要仪器 |
| 3.1.2 培养基 |
| 3.1.3 其他实验材料 |
| 3.2 实验方法 |
| 3.2.1 土壤样品的采集和预处理 |
| 3.2.2 放线菌的分离和纯化 |
| 3.2.3 抗香蕉枯萎病放线菌的筛选 |
| 3.2.4 拮抗放线菌发酵液的制备和抑菌活性测定 |
| 3.2.5 抗香蕉枯萎病放线菌发酵液的稳定性研究 |
| 3.2.6 香蕉枯萎病盆栽防治效果实验 |
| 3.2.7 香蕉枯萎病的田间防治效果试验 |
| 3.2.8 拮抗放线菌的初步鉴定 |
| 3.2.9 强拮抗活性放线菌菌株的16SrDNA序列测定及系统发育测定 |
| 4 结果与分析 |
| 4.1 土壤放线菌的分离结果 |
| 4.1.1 不同海拔土壤中放线菌的分离结果 |
| 4.1.2 不同生境土壤中放线菌的分离结果 |
| 4.1.3 土壤预处理方法对放线菌分离影响的结果 |
| 4.1.4 培养基种类对放线菌分离影响的结果 |
| 4.1.5 抑制剂对土壤放线菌分离效果的影响结果 |
| 4.2 土壤拮抗放线菌的筛选结果 |
| 4.3 土壤拮抗放线菌发酵液的抑菌活性测定结果 |
| 4.4 强抑菌活性放线菌发酵液稳定性的研究结果 |
| 4.4.1 温度对放线菌发酵液稳定性影响的研究结果 |
| 4.4.2 PH对放线菌发酵液稳定性影响的研究结果 |
| 4.4.3 光照对放线菌发酵液稳定性影响的研究结果 |
| 4.5 香蕉枯萎病盆栽防治效果试验 |
| 4.6 香蕉枯萎病田间防治效果试验 |
| 4.7 拮抗放线菌菌株鉴定的初步结果 |
| 4.7.1 强抑菌活性放线菌菌株DL28的初步鉴定 |
| 4.7.2 强抑菌活性放线菌菌株DL24的初步鉴定 |
| 5 结论 |
| 6 讨论 |
| 6.1 关于放线菌的生态分布问题 |
| 6.2 关于放线菌的分离问题 |
| 6.3 关于土壤拮抗放线菌的筛选问题 |
| 6.4 关于香蕉枯萎病的防治问题 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 致谢 |
四、核苷N9705的抗病毒、抗菌杀虫活性研究（论文参考文献）
- [1]具有农药活性的微生物源核苷类化合物[J]. 柯少勇,吴兆圆,万中义,方伟,张亚妮,王开梅. 化学进展, 2019(07)
- [2]松材线虫醇脱氢酶基因的生理功能研究[D]. 王林松. 青岛大学, 2019(07)
- [3]微生物来源的核苷类农药活性化合物研究进展[A]. 王开梅,吴兆圆,柯少勇,万中义,方伟,张亚妮,张志刚. 绿色植保与乡村振兴——中国植物保护学会2018年学术年会论文集, 2018
- [4]植物源杀松材线虫活性成分的分离鉴定及杀线机理研究[D]. 郭群群. 青岛大学, 2016(12)
- [5]新型核苷类似物FNC在Beagle犬体内的血浆动力学及大鼠组织分布研究[D]. 陈晓静. 郑州大学, 2014(02)
- [6]大叶藻抑制松材线虫及其携带细菌活性成分的分离与鉴定[D]. 王景玉. 青岛大学, 2013(S1)
- [7]海洋放线菌小单孢菌（Micromonospora）对松材线虫（Bursaphelenchus xylophilus）的作用[D]. 黄响珠. 福建农林大学, 2013(01)
- [8]具有杀松材线虫活性的苏云金芽孢杆菌cry基因的克隆[D]. 刘娟. 浙江农林大学, 2012(12)
- [9]小茴香粗提液对松材线虫的杀灭作用及其对松材线虫携带细菌抑制作用的研究[D]. 郭延志. 青岛大学, 2012(12)
- [10]抗香蕉枯萎病土壤放线菌的分离及田间防治效果试验[D]. 茹祥. 海南大学, 2012(03)